奶牛输卵管上皮细胞前列腺素e2和f2α对其合成酶mrna表达的反馈调控作用研究

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1、+分类号R978.11学校代码10129UDC11.220学号2009210048奶牛输卵管上皮细胞前列腺素E2和F2α对其合成酶mRNA表达的反馈调控作用研究ThefeedbackregulationofProstaglandinE2andF2αontheExpressionofitsSynthasemRNAinBovineOviductalEpithelialCells申请人：樊凤娇学科门类：农学学科专业：基础兽医学研究方向：兽医药理学与毒理学指导教师：曹金山教授论文提交日期：二〇一二年五月摘要前列腺素是花生四烯酸的环氧合酶代谢产物，为二十碳不

2、饱和脂肪酸。体内分布广泛。前列腺素类化合物是动物繁殖过程中关键的调节因子，可影响生殖生理过程的多个环节，本研究旨在探讨雌激素(estrogen,E2)对奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素E2和F2α合成酶(PGES和PGFS)表达的影响，探讨前列腺素EP受体激动剂butaprost和FP受体激动剂fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞中环氧合酶1（COX-1）、环氧合酶2（COX-2）以及PGES和PGFS表达的影响，以及EP受体激动剂butaprost和FP受体激动剂fluprostenol对前列腺素PGE2和PGF2α合成分泌的调控作用。方法：

3、1）建立荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞的体外培养技术，细胞传至第四代作-12为实验用细胞。2）用不同时间（2h、4h、8h、16h、24h和48h）和不同浓度（10，-11-10-910，10，10mol/L）的雌激素E2作用于奶牛输卵管上皮细胞，采用实时荧光定量PCR技术检测上皮细胞中PGES和PGFS的mRNA表达量。3）以吲哚美辛-6-5-12-9(10-10mol/L)消除上皮细胞中内源性前列腺素的干扰，用不同浓度（10-10mol/L）的E2作用于上皮细胞，采用实时荧光定量PCR技术检测PGES和PGFS的mRNA表-9-5达量。4）分别以不同

4、浓度（10-10mol/L）的butaprost和fluprostenol作用于奶牛输-5卵管上皮细胞，以吲哚美辛（10mol/L）消除上皮细胞内源性前列腺素的干扰，采用RT-PCR技术检测COX-1、COX-2、PGES和PGFS的mRNA表达量。5）以雌激素-12-9-5(10mol/L)和不同浓度（10-10mol/L）的butaprost和fluprostenol作用奶牛输卵管上皮细胞，用ELISA技术检测PGE2和PGF2α的合成分泌量。结果：首先，成功培养得到了奶牛输卵管上皮细胞的原代细胞和传代细胞，且第-10-12四代细胞生长良好。其

5、次，E2在浓度为10mol/L作用4h和浓度为10mol/L作用24h时，PGES和PGFS的mRNA表达量分别与空白组对比呈显著性增高。第三，以-6-5吲哚美辛(10-10mol/L)消除内源性前列腺素的干扰后，PGES和PGFS的mRNA表达量与空白组对比呈显著性增高，且在添加E2后，其对PGES和PGFS的表达量-9-5的增高作用更加显著。第四，分别以不同浓度（10-10mol/L）的butaprost和fluprostenol作用4h后，COX-1的表达与空白相比无显著性差异，COX-2的表达量与空白组对比呈显著性增高，其表达量与给药浓度呈

6、正相关。PGES和PGFS的表达量分别与空白组对比呈显著性下降，其表达量与给药浓度呈负相关。以吲哚美辛消除内源性前列腺素的干扰后，添加butaprost和fluprostenol作用4h，COX-1、COX-2、PGES和PGFS的表达量与单独添加butaprost和fluprostenol的结果相似。第五，E2-9-5作用下以不同浓度（10-10mol/L）的butaprost和fluprostenol作用24h后，PGE2和PGF2α的分泌量与给药量呈正相关。结论：实验结果表明，E2可促进奶牛输卵管上皮细胞前列腺素的合成，PGE2和PGF2α对

7、COX-2具有正调控作用，对PGES和PGFS具有负调控作用，但总体上对PGE2和PGF2α的分泌具有正反馈调控作用。关键词：雌激素；奶牛输卵管上皮细胞；前列腺素；COX-1；COX-2；PGES；PGFS；ThefeedbackregulationofProstaglandinE2andF2αontheExpressionofitsSynthasemRNAinBovineOviductalEpithelialCellsAbstractPurpose:Prostaglandinisakindoftwenty-carbonUnsaturatedfat

8、tyacidsthatmetabolizedarachidonicacidbycyclooxygenaseandwhich