红褐斑腿蝗酚氧化酶原基因的克隆、特性分析及表达研究.pdf

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1、一红揖斑腿蝗酚氢丝堕厦基固鲍杰隆∑缝!睦．盆堑区塞垫巫窒论文作者签名：耸魈指导教师签名：论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员l：委员2：委员3：委员4：委员5：答辩日期：川{

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8、}IIlI}If}IlfflI哪Y1910053杭州师范大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得揎丛堙整盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡

9、献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：鸷褥真签字日期：训降6月胭学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解揎幽竖垫盘鲎有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权揎必塑整太鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：杆楣真签字日期：加f／年6月f日导师签名：签字日期：加f／年己月／日杭州师范大学硕士学位论文致谢本研究及学位论文是在导师王世贵教授的亲切关怀和悉心指导下完成的。恩师严肃的科学态度，严谨的治学

10、精神，埔益求精的工作作风，深深地感染和激励着我。在攻读硕士的这三年里，王老师不仅为我创造了优越的科研和学习环境，在学业上给我以精心指导，生活上给我以无微不至的关怀，同时在思想上、人生态度和意志品质方面给予了谆谆教诲，这些教益必将激励着我在今后的人生道路上奋勇向前，在此谨向王老师致以最诚挚的谢意和崇高的敬意!在此，我要特别感谢唐斌老师、高建芳老师，正是因为你们的帮助和指点，使得我在开展研究工作的过程中能够少走弯路，在分子生物学技能上也有了突飞猛进的提高。由衷地感谢5号实验楼415实验室的各位同门陪我一同度过研究生这三年快乐的时光。感谢我的师姐黄淑娟、蔡来来，师兄毛钟鸣、迟名，师弟李灵顺、姜棋，

11、师妹魏萍，还有室友徐琦、邹琦，正是由于你们大家的关心和帮助，我才能克服一个个困难和疑惑，并顺利完成本论文写作。衷心的感谢我的亲人对我的关心、支持和理解，感谢含辛茹苦养育我的父母，你们是我最大的精神支柱，正是你们的支持，给了我动力，让我在前进的道路上不惧怕任何困难。感谢我的弟弟，在我面对压力时，始终能够同我一起分担。感谢三年来一如既往为我默默付出的男友陈孙禄，你的无限包容和关爱支持着为梦想奋斗不息，也让我学会了成长。本研究工作得到浙江省钱江人才项目的资助。在此表示我的感激之情。在论文即将完成之际，我的心情无法平静，从开始构思课题到论文的顺利完成，我经历了很多．也学到了很多，期间有很多可敬可爱的

12、师长、同学、朋友给了我很多无言的帮助，在这里请接受我诚挚的谢意!杭州师范久学硕士学位论文中文摘要酚氧化酶原激活系统在昆虫的先天性免疫防御过程中起着十分重要的作用。在先前·b的研究中，已克隆得到红褐斑腿蝗一个酚氧化酶原基因亚基一一。即D2。本文以红褐斑腿蝗o，口，7，印sp，力g材括(sl矗1)为研究对象，采用RT-PCR结合RACE技术扩增得到另一个酚氧化酶原基因亚基(Cp尸尸D，)cDNA全长，并对印尸尸DJ『进行比对分析。通过PCR技术结合Nonhemblot的技术原理，研究酚氧化酶原基因(印尸尸DJ及Cp尸尸D2)在红褐斑腿蝗11种组织的分布情况，比较了不同发育阶段及不同季节时期两者的

13、表达差异及变化，同时采用大肠杆菌感染成虫，以考查蝗虫在应对外来病原菌感染时酚氧化酶原基因的表达的变化。研究结果如下：1．通过RT．PCR结合RACE技术克隆得到C妒PD，基因cDNA序列全长。Cp尸尸D，cDNA序列全长为2347bp，开放阅读框为2l87bp，编码728个氨基酸。推测该蛋白分子量为84，261Da，等电点为6．9l。该基因含有其他昆虫都具有2个保守的铜离子结合位点，位点内包含6个保守的组氨酸残基。与其它昆虫酚氧化酶原基因不同的是，印尸户D，cDNA推导的蛋白含有长为21个氨基酸残基的信号肽序列，预示着其可能作为一种分泌蛋白行使相应的功能。采用BLASTP同源序列搜索结果表明

14、，红褐斑腿蝗尸尸D，与东亚飞蝗尸尸D，有高达87％的同源性。通过系统进化分析，结果也表明红褐斑腿蝗与东亚飞蝗的亲缘关系最近。2．研究C∥)尸D，及C≯即D2在红褐斑腿蝗11个不同组织中的分布情况，结果显示Cp尸户D』仅在6个组织中表达，在脂肪体及马氏管中Cp即D，的表达最强，而在气管及直肠中表达较弱；C矿P∞在11个组织中均有不同水平的表达，脂肪体及心脏组织中检测到的表达最强，在中肠及卵巢表达很弱。研究表明，