蛋白质银染原理与方法

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1、蛋白质银染原理与方法2009-04-2816:38:24来源:未知【大中小】评论:条-摘要：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。①SDS-PAGE电泳。注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与CommassieBlue染色比较，银染加样量要少。否则难以得到清晰的电泳分辨率。②电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒

2、盖中。加入25mlFixingSolution（固定液），室温振荡保温30min。胶需要完全淹没在固定液中。③彻底弃去固定液，加入25mlIncubationSolution（保育液），室温振荡保温30min。胶需要完全淹没在保育液中。④彻底弃去IncubationSolution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。⑤准备：取2.5ml10XSilveringSolution,加入22.5mL水，混匀后使用。⑥弃去洗涤的水，加入25mlSilveringSolution(银染液)。室温振荡保温20min。

3、⑦彻底弃去银染液，加入25mLDevelopingSolution（显色液），室温振荡保温1~10min。注意观察目的条带。如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。显色时间不要过长，否则本底较深。⑧彻底弃去显色液,加入25mLStoppingSolution（终止液），室温振荡保温10min。⑨彻底弃去StoppingSolution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。弃去洗涤的水，加入25mLPreservingSolution（保护液），室温振荡保温20min。银染PAGE胶可以拍照保存，也可以室温玻璃

4、纸干燥。今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。能不能提供详细的银染步骤呢？好像有好几种版本，哪位大侠有经验的希望能点拨一下？hotstoewrote:1.取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2.0.1%硝酸银染色10分钟.3.弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方:10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.我的经验是：1.取下凝胶用去离子水冼胶30秒三次，2.0.1%硝酸银染色10分钟.3

5、.弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟（换2次去离子水）4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.不要试图将所有的条带都显出来，要求越高可能导致背景就深，5.染色后要用固定液（冰乙酸）终止染色，6.固定3分钟后再用去离子水洗涤2遍（整个试验比较费去离子水）。多谢各位的指导!我现在是在12%的凝胶里加入丙三醇优化.现在的问题是背景和条带都很浅.仍能分辨读出条带数,但是拍摄出来的还是不清楚.请问有必要提高硝酸银的浓度吗?(我现在用的是0.15%的硝酸银)向各位请教几个关于TRAP-银染的问题，多谢各位指教。我用的是鼎国的试

6、剂盒做的TRAP，用的是8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后是银染，但是结果很令人失望，电泳的胶取下来的时候竟然破成了好几片，染色后也看不出什么结果，我想问的是TRAP-银染，这个实验成功的关键步骤在哪里，哪一步最容易出问题？银染后理想的结果应该是什么样子的？请说的具体点好吗，谢谢。背景是什么样的比较好，还有条带应该是什么颜色，有多深，什么样的。谢谢了！我的做法是这样的，染色效果还可以10%的乙醇固定10分钟，ddH2O洗一次，2分钟。1%的硝酸脱色4分钟，ddH2O洗两次，每次1分钟。0.2%AgNO3染色20分钟，ddH2O

7、洗三次，每次1分钟。NaCO3-甲醛显色至条带出现。我的感觉是乙醇和硝酸重复使用的次数不要太多，这样效果不好，NaCO3-甲醛得质量很关键，我们有一次换了试剂，效果非常差。1)10%乙醇，5min；2)双蒸水过水2次（短暂）；3)1%硝酸，5min；4)双蒸水过水；5)0.2%硝酸银，在摇床摇动10min；6)双蒸水过水（不超过5sec）；7)显影液显影，边晃动边显影，至显影满意为止；8)10%冰乙酸固定，至无气泡；9)40℃烘箱，3天；10)剥离，保存。Notes:显影液的配制：无水碳酸钠3.09g甲醛100ulm硫代

8、硫酸钠（1%）10ul双蒸水100ml银染法分以下几个程序：1、固定2、敏化3、银育4、显影5、停显此外，其间还有数步的漂洗程序。在你的银染方法中没有敏化过程，不过也中可以的，只是灵敏度会下降。银染法还可分为碱性银染和酸性银染法，你的方法为酸性银染法。为何称为酸法？是指硝酸银这一强酸弱碱盐溶液因水解呈酸性而得名？何为