蛋白质银染原理与方法

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1、-原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。                  ①                    SDS-PAGE电泳。注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与Commassie                      Blue染色比较，银染加样量要少。否则难以得到清晰的电泳分辨率。②                    电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。加入25m

2、lFixing                      Solution（固定液），室温振荡保温30min。胶需要完全淹没在固定液中。③                  彻底弃去固定液，加入25ml                    Incubation            Solution（保育液），室温振荡保温30min。胶需要完全淹没在保育液中。④                    彻底弃去Incubation                      Solution（保育液），用

3、50ml去离子水洗3次，每次5min。⑤                  准备：取2.5ml10X                      SilveringSolution,加入22.5mL水，混匀后使用。⑥                弃去洗涤的水，加入25ml                      SilveringSolution(银染液)。室温振荡保温20min。                      ⑦                彻底弃去银染液，加入25mL        

4、              Developing                      Solution（显色液），室温振荡保温1~10min。注意观察目的条带。如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。显色时间不要过长，否则本底较深。                      ⑧                  彻底弃去显色液,                      加入25mLStoppingSolution（终止液），室温振荡保温10min。                      ⑨  

5、                彻底弃去Stopping                      Solution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。                      弃去洗涤的水，加入25mLPreserving                      Solution（保护液），室温振荡保温20min。银染PAGE胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。能不能提供详细的银染步骤呢？好像有好几种版本，哪

6、位大侠有经验的希望能点拨一下？hotstoewrote:1.取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2.0.1%硝酸银染色10分钟.3.弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方:10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.我的经验是：1.取下凝胶用去离子水冼胶30秒三次，2.0.1%硝酸银染色10分钟.3.弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟（换2次去离子水）4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带

7、为止.不要试图将所有的条带都显出来，要求越高可能导致背景就深，5.染色后要用固定液（冰乙酸）终止染色，6.固定3分钟后再用去离子水洗涤2遍（整个试验比较费去离子水）。多谢各位的指导!我现在是在12%的凝胶里加入丙三醇优化.现在的问题是背景和条带都很浅.仍能分辨读出条带数,但是拍摄出来的还是不清楚.请问有必要提高硝酸银的浓度吗?(我现在用的是0.15%的硝酸银)向各位请教几个关于TRAP-银染的问题，多谢各位指教。我用的是鼎国的试剂盒做的TRAP，用的是8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后是银染，但是结果很令人失

8、望，电泳的胶取下来的时候竟然破成了好几片，染色后也看不出什么结果，我想问的是TRAP-银染，这个实验成功的关键步骤在哪里，哪一步最容易出问题？银染后理想的结果应该是什么样子的？请说的具体点好吗，谢谢。背景是什么样的比较好，还有条带应该是什么颜色，有多深，什么样的。谢谢了！我的做法是这样的，染色效果还可以10%的乙醇固定10分钟，ddH2O洗一次，2分钟。1%的硝酸脱色4分钟，ddH2O洗两次，每次1分钟。0.2%AgNO3染色20分钟，dd