脑脊液常规操作规程.doc

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1、常规分析项目ZDFYJYK/SOP-A-02-2013第1版第0次修改1．检验目的指导脑脊液（CSF)常规测定。2．方法原理2.1脑脊液是存在于脑室及蛛网膜下腔中的无色透明液体。由于脉络丛上皮细胞对血浆中各种物质的选择性分泌和超滤作用，血浆中各种成分对血脑屏障的通透性各有不同。其中最易通过血脑屏障的是氯、钠、镁离子及乙醇;其次为清蛋白、葡萄糖、钙离子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐;纤维蛋白原、补体、抗体、某些药物、胆红素、胆固醇则极难或不能通过。中枢神经系统任何部位发生器质性病变时，如感染、炎症、肿瘤、外伤、水肿和阻塞等都可以引起脑脊液成分的改变。通过对脑脊液理学检查，显微镜检查、化

2、学和免疫学检查及脑脊液病原学检查，可对疾病的诊断、治疗和预后判断提供依据。2.2脑脊液（CSF）常规测定容包括:颜色、性状、有核细胞计数、红细胞计数、氏试验、细菌等。2.3氏（pandys)试验：CSF中的球蛋白与苯酚结合，形成不溶性的蛋白盐而产生白色混浊或沉淀。1颜色（COLOR)6中性粒细胞（NE)2透明度（clearity)7淋巴细胞（LY）3凝固性（coagulability）8单核细胞（MO）4脑脊液有核细胞计数（CSF—NUCL)9氏试验（pandystest）5脑脊液红细胞计数（CSF—RBC)3．方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵

3、敏度和特4.标本类型4.1标本类型：新鲜CSF。4.2标本拒收条件：拒收延迟室温2h、冷藏6h未送达标本。4.3标本保存与稳定性：一般室温1h完成检验，久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查。第6页共6页常规分析项目ZDFYJYK/SOP-A-02-2013第1版第0次修改5.要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统5.1标本容器：BD无促凝成分红头管或洁净干燥带盖玻璃管。5.2试剂5.2.1试剂组分：生理盐水0.9%Nacl溶液白细胞稀释液1%冰乙酸（1ml分析纯冰醋酸+蒸馏水至100ml)氏快速瑞氏染色液A液：曙红、甲醇B液：亚甲蓝氏试剂10%苯酚溶液（纯苯酚10m

4、l+蒸馏水至100ml）5.2.2试剂存储和有效期：试剂名称存储条件有效期开瓶有效期位置生理盐水室温1年1年存货柜/血常规室操作台冰乙酸室温2年1年药品柜1%乙酸冷藏1年1年试剂冰箱10%苯酚溶液室温1年1年药品柜氏快速瑞氏染色液室温2年6个月药品柜/染色操作台5.3仪器：OLYMPUS光学显微镜，血细胞计数板。6.校准程序（计量学溯源性）不适用7.质量控制，控制品使用水平和频率，允许限的纠正措施不适用8.程序步骤第6页共6页常规分析项目ZDFYJYK/SOP-A-02-2013第1版第0次修改8.1一般性状检查：轻轻混匀CSF，观察量、颜色、有无凝块和透明度（一般细胞数≥300

5、/μl个时或蛋白增加可产生混浊），并记录。8.2显微镜检查8.2.1细胞计数（无凝块标本）（1）清或微混标本：a)混匀后直接冲入计数池，计数四角四大方格细胞总数（包括RBC，NUCL）。b)用白细胞稀释液作1：1稀释，计数有核细胞数c)红细胞数＝细胞总数－有核细胞数（当白细胞数≥30个/μl时，在白细胞计数池中直接分类至少50个白细胞）（2）混浊及以上标本：外观稀释样本量稀释液/溶解剂粉色/轻度混浊1:2020μl380μl红色/混浊1:5010μl490μl带血量极高/极度混浊1:10010μl990μla)稀释标本：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数细胞总数；b)溶解RBC

6、：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数有核细胞数；c)冲池；计数d)红细胞数=细胞总数－有核细胞数8.2.2有凝块或粘稠标本：（1）用吸管旋转并挤压凝块，挤出里面的液体及细胞。（2）2000rpm×5min离心，分离上清液和沉渣。（3）混匀沉渣，涂片，用高倍镜观察NUCL、RBC。（4）报告每高倍镜视野的红细胞和有核细胞数。8.2.3离心获取沉渣和上清液：将完成计数的CSF离心，2000rpm×5min离心,吸出上清液于另一试管，并在试管上编号。8.2.4瑞氏染色：当NUCL>106/μl时进行操作。将沉渣混匀涂片，厚薄根据有核细胞数而定，血性标本可考虑推片。待干后，瑞氏染色进行

7、分类（分100个NUCL）；如见有不能分类细胞或怀疑有恶性细胞时，应请示上级主管，由有经验的上级主管进行分析，并在报告时另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤细胞等。8.3氏试验8.3.1试验操作：取小试管一支，加入10%的石碳酸水溶液约5ml，用一次性吸管加一滴CSF上清液立即在黑色背景灯照下观察结果。8.3.2结果判定：阴性：清晰透明。弱阳性（±）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到。第6页共6页常规分析项目ZDFYJYK/SOP-A-02-2013第1版第0次修改阳性（+）：灰白色