基因工程育种.ppt

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1、第6章从杂交育种到基因工程第2节基因工程及其应用能发光的水母能否能否让热带鱼也能发光?设想不能发光的热带斑马鱼超级小鼠与超级鱼能产生人胰岛素的大肠杆菌基因“嫁接”又称基因拼接技术,或重组DNA技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向的改造生物的遗传性状。基因工程(geneengineering)1.原理：2.操作水平：3.结果：基因重组DNA分子水平定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。基因工程(geneengineering)培育转基因大肠杆菌的简要过程：你认为上述培育转基因大肠杆菌的关键步骤有哪些？普通大

2、肠杆菌(不能分泌胰岛素)人体组织细胞提取胰岛素基因与运载体DNA拼接导入大肠杆菌(含胰岛素基因)转基因大肠杆菌(能分泌胰岛素)实例展示培育转基因大肠杆菌的关键步骤：1.ONE胰岛素基因从人体细胞内提取出来2.TWO胰岛素基因与运载体DNA连接3.THREE胰岛素基因导入受体(大肠杆菌)细胞基因的“剪刀”基因的“针线”基因的运载体如:EcoRI1、该限制酶只能识别GAATTC的序列，说明了限制酶具有的特性是。2、EcoRI限制酶识别了GAATTC的序列后，将会发生什么样的变化？专一性1.基因的剪刀—限制性内切酶基因操作(geneengineering)的工具模型构建1CTTCATGAATTCCC

3、TAAGAAGTACTTAAGGGATTGGCATCTTAAAATTCCGTAG练习使用EcoRI剪切目的基因CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATTGGCATCTTAAAATTCCGTAG目的基因黏性末端什么叫黏性末端？被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。2.分子针线—DNA连接酶(DNAlinking-enzyme)DNA连接酶连接的是两个脱氧核苷酸(deoxyribonucleotide)分子的什么部位？基因操作(geneengineering)的工具DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起

4、来，是把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子才能形成。模型构建2使用DNA连接酶制作重组DNA分子甲片段CTTCATGAATTCCCTAAGAAGTACTTAAGGGATT乙片段GGCATCTTAAAATTCCGTAG重组DNA分子RecombinantDNAGGCATCTTAAAATTCCGTAGDNA聚合酶和DNA连接酶的比较不同点相同点DNA聚合酶DNA连接酶连接DNA片段不需要模板连接的是游离的脱氧核苷酸需要模板连接不同脱氧核苷酸之间的磷酸和脱氧核糖，形成磷酸二酯键目的基因(如人的胰岛素基因)怎样才能导入受体细胞(如大肠杆菌细胞)？3.基因的运输工具——运载体(carr

5、ying)常用的运载体(carrying)有两类：(1)细菌细胞质的质粒(plasmid)(2)噬菌体(bacteriophages)或某些动植物病毒(virus)基因操作(geneengineering)的工具基因操作(geneengineering)的工具作为运载体必须具备哪些条件？1.能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2.具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。3.对宿主细胞无毒害作用。4.具有某些标记基因，便于进行筛选。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。1、细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子；2、质粒的存在对宿主细胞无影响；3、质粒的复制只能在宿主

6、细胞内完成。大肠杆菌的质粒(plasmid)：三、基因工程基本步骤1、获取目的基因基因工程的第一步，是取得人们所需要的特定基因，也就是目的基因如抗虫基因，抗病基因、种子的贮存蛋白基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等都是目的基因。要获得目的基因，主要有两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因，另一条是人工合成基因。2、目的基因与运载体结合用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。细菌供体细胞取出质粒取出DNA用同种限制酶切断DNA用连接酶连接目的基因3、将目的基因

7、导入受体细胞将重组DNA导入受体细胞扩增4、目的基因的表达和检测大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。无表达产物无表达产物有表达产物无表达产物基因工程(geneengineering)的“四步曲”提取目的基因1目的