乙肝病毒感染对细胞基本自噬的影响.pdf

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1、ResearchPaper研究报告微生物学报ActaMicrobiologicaSinica50(12):1651－1656;4December2010ISSN0001－6209;CN11－1995/Qhttp://journals.im.ac.cn/actamicrocn乙肝病毒感染对细胞基本自噬的影响1，21，21*王娟，时迎娣，杨怀义1(中国科学院微生物研究所，病原微生物与免疫学院重点实验室，北京100101)2(中国科学院研究生院，北京100039)摘要:【目的】慢性乙肝病毒(HepatitisBvirus，HBV)感染在肝硬化和肝癌的发生过程中起着重要的作用，通过研究HBV感染对

2、细胞基本自噬的影响，为HBV感染诱发肝癌以及HBV的免疫逃逸机理研究提供新的思路。【方法】本研究利用乙肝病毒表达质粒瞬时或稳定转染不同肝细胞，通过计数绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)聚集数目检测自噬小体形成，westernblot检测LC3(microtubule-associatedproteinlightchain3，微管相关蛋白质轻链3)脂酰化和p62的降解，通过构建HBVB型和C型X蛋白(HBx)的表达质粒并瞬时转染肝癌细胞和正常肝细胞，对不同基因型X蛋白对细胞自噬的影响进行了分析。【结果】乙肝病毒感染后促进了LC3的脂酰化和p62的降解，增加

3、了自噬小体的形成，增强了细胞的基本自噬。进一步研究发现，HBV感染增强的细胞基本自噬水平由HBx所引发，且C型HBx比B型对细胞基本自噬的增加更加显著。【结论】HBV通过HBx增强细胞的基本自噬，且不同基因型HBx对细胞基本自噬的增强程度不同，为进一步阐明HBV感染机理奠定了基础。关键词:乙肝病毒;细胞自噬;X蛋白中图分类号:S852文献标识码:A文章编号:0001-6209(2010)12-1651-06［10］乙肝病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染引起的白质降解途径。近年来研究发现，细胞自噬不仅［1］乙型肝炎严重影响着我国人口健康。由于该病在细胞生长发育、成熟分化等过程

4、中起着重要的作毒为“非溶细胞”性病毒，且病毒感染后不能诱导干用，且与多种疾病发生、病毒感染与免疫等密切相［11-15］扰素的产生，故HBV感染后常易造成对宿主细胞的关。最近研究发现，HBx能通过上调Beclin1［16］免疫逃逸而建立起病毒的慢性感染。HBV慢性感的表达，增强饥饿诱导下细胞自噬的发生。那染不仅难以治愈，造成患者病情的反复发作，且与其么，HBV感染是否可以通过HBx的作用，增强细胞肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)的发生密基本自噬的发生，从而促进病毒的复制循环呢?为［2－4］切相关。HBV属嗜肝DNA病毒科(Hepadnav-此，我们利用HBV

5、基因组和HBx基因分别转染iridae)，其基因组大小为3.2kb，编码有4种病毒蛋Huh7细胞、HepG2细胞、人张氏肝细胞(Changliver［5］白。其中X基因编码的X蛋白(HBx)具有多种cell)，研究了其对转染细胞的本底水平细胞自噬不同的功能，其在病毒复制、细胞转化、HBV诱发的的影响。结果发现，HBV感染可增强细胞基本自［6－9］HCC发生过程中都起着十分重要的作用。噬的发生。同时，我们研究还发现，不同基因型细胞自噬(Autophagy)是真核细胞用于清除胞HBx对本底水平细胞自噬诱导的效应存在着一定内聚集物、损伤细胞器而维持其稳态平衡的一种蛋的差异，这为进一步阐明HBx对

6、HBV复制循环，基金项目:国家自然科学基金(30770086，31070149)*通信作者。Tel:+86-10-64807476;Fax:+86-10-64807381;E-mail:yanghy@im.ac.cn作者简介:王娟(1984－)，女，河南省郑州市人，硕士研究生，从事分子病毒学研究。E-mail:wintersweet1984@126.com收稿日期:2010-05-06;修回日期:2010-05-201652JuanWangetal./ActaMicrobiologicaSinica(2010)50(12)尤其是HBV引起的肝细胞癌的发生提供了一定胞培养基中培养。HepG2

7、.2.15细胞于10%胎牛血的依据。清和500mg/LG418，100g/L链霉素及100U/mL的青霉素的DMEM细胞培养基中培养。其培养均在1材料和方法37℃、5%CO2条件下进行。1.1材料1.4细胞转染1.1.1质粒、菌株、细胞:pHBV1.3质粒，pET-21a-使用Fugene转染试剂，按照质粒(μg)∶Fugenebx质粒、pET-21a-cx质粒、GFP-LC3质粒为本实验(μL)=1∶3比例，每孔2μg