鬼笔环肽标记法观察微丝的分布.pdf

《鬼笔环肽标记法观察微丝的分布.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国医学装备!""#年$月第!卷第$期%&’()*+,’-)./01’23+(4!""#51(+67.8!9:8$EH+研究与报告,细胞骨架的激光共焦研究技术M22.’-)4’7(7N%7(N7-).<)O+J=-)((’(P*’-J7O-72Q’(-Q47OL+.+47(J+O+)J-&刘继红"蔡学泳"何其华#北京大学医药卫生分析中心"北京G"""?I’(文章编号)G$R!C?!R"*!""#$"$CEHC"I(中图分类号)SIG!(文献标识码)T+摘要,激光扫描共聚焦显微镜*%<=*’是细胞骨架研究的新手段"本文简要介绍了细胞骨架的

2、共焦研究技术"包括细胞骨架的荧光标记方法和共焦图像采集与处理技术"分析了%<=*在细胞骨架研究中的优势%+关键词,激光共聚焦显微镜-细胞骨架!"#$%&’$(%7(N7-).<)O+J=-)((’(P*’-J7O-72Q’O)(+UJ+O+)J-&3+4&7,’(-Q47OL+.+47(V)22.’-)4’7(7N4&’O4+-&(’01+’(-Q47OL+.+47(J+O+)J-&’O,+O-J’K+,V’(-.1,’(PN.17J+O-+(-+2J7K+O)(,%7(N7-).’3)P+)-01’J+)(,’3)P+2J7-+OO7

3、N-Q47OL+.+47(J+O+)J-&8M,W)(4)P+7N4&+O+4+-&(’01+)J+).O7)().QO+,8)*+,-%.#(%7(N7-).<)O+J=-)((’(P*’-J7O-72Q--Q47OL+.+47(激光扫描共聚焦显微镜;%<=*>是?"年代发展起来动"就可得到样品不同层面连续的光切图像%我们将从的目前世界上先进的分子细胞生物学分析仪器"较传统共聚焦显微镜系统获得的连续光切图像比喻为显微%A"显微镜有着不可比拟的优越性%传统的荧光显微镜是采从这些连续的光切图像可通过三维重组模拟出样品真用很宽的照明光束照射

4、在整个样品上"样品整个厚度被实的立体结构%同时连续照明"样品的焦平面以及焦平面以外的结构共共聚焦显微镜凭借其特有的成像原理大大提高了同成像"造成图像的模糊%这使目镜中的整个图像分辨分辨率"它在BCD平面的横向分辨率比普通的显微镜要率降低"清晰度下降%当样品比较厚时这种现象尤其突高出约E"F"而且它还可以对厚样本进行非介入无损伤出"而激光扫描共焦显微镜解决了这个问题%性连续光学切片"得到三维重组的空间立体图像%!激光共聚焦显微镜的工作原理近十年来"人们已广泛应用%<=*来观察和分析细激光共聚焦显微镜选用单色性好"单向性好的激光胞内的微细结

5、构和分子在细胞内的分布"观察细胞内离作为光源%激光通过一个照明针孔到达样品"样品只被子"蛋白分子的变化"包括细胞内钙"活性氧"转录因子"一个具有精密几何形状的光点照射在焦平面上"只有被表面分子"细胞凋亡"细胞膜流动性"细胞内分子的运照射到的特定点所发射的荧光通过探测针孔到达检测动"细胞间的缝隙连接"蛋白间的相互作用等%共聚焦的器"该点以外的任何发射荧光均被该针孔阻挡%照明针分析研究已经涉及了生物学的几乎所有领域%孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的"这$细胞骨架的共聚焦研究技术就是激光扫描共焦显微镜系统中共焦的真正含义%激光GH

6、$I年"=.)14+JK)-L采用戊二醛常温固定方法"首共聚焦显微镜利用光电倍增管采集和放大信号%计算机先使用电镜在水螅刺细胞中发现了微管%随后"微丝和以像点的方式将成像点显示在屏幕上"由光路中的扫描中间丝相继被发现%它们广泛存在于真核细胞中"细胞系统在整个样品上扫描"在显示器上产生一幅完整图骨架蛋白的含量占细胞总蛋白含量的G"!&&I"!"它像%这幅图像即为焦平面的共焦图像%只要载物台沿着们与细胞形态的维持"细胞器的空间定位及位置改变"@轴上下移动"将样品新的一个层面移到共焦面上"样细胞的运动"细胞内的物质运输"细胞内的信号传导"免品

7、的这个新层面又成像在显示器上%随着@轴的不断移疫行为和细胞分裂等活动有密切的关系%作者简介!刘继红"女"#!"#$%$硕士%#"中国医学装备!""#年$月第!卷第$期%&’()*+,’-)./01’23+(4!""#51(+67.8!9:8$细胞骨架主要有微管!3’-;741<.+"*=#"微丝和组织的空间图像$>3’-;7?’.)3+(4"*@A中间丝>’(4+;3+,’)4+?’.)3+(4"B@C三种类!8V卵细胞纺锤体的激光共焦研究技术型$它们分别由不同的蛋白单体组装而成"其中微管蛋以下就以家兔卵细胞的纺锤体的共焦研究为例来白!

8、41<1.’(%&肌动蛋白!)-4’(%&波形蛋白!D’3+(4’(%等是说明细胞骨架共焦研究技术和方法$细胞骨架的重要组成部分"也是最常被研究的细胞骨架!8V8E*BB期卵母细胞纺锤体的荧光染色’卵母细胞