微丝的观察实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划微丝的观察实验报告　　实验二微丝的染色及形态观察　　【实验目的】　　1.掌握微丝的染色方法。　　2.了解光镜和电镜下的微丝基本形态和结构。　　3.了解细胞松弛素B对微丝的作用及原理。　　4.了解考马斯亮蓝染料在细胞生物技术中的应用。　　【实验原理】　　真核细胞胞质中纵横交错的纤维网称为细胞骨架，在维持细胞形状和运动方面具有重要作用。根据组成成分和组装结构的不同，分为微管、微丝和中间纤维。微丝普遍存在于多种细胞，对细胞的

2、形状和运动有一定作用。微丝由蛋白单体聚合形成，细胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合，从而破坏微丝，改变细胞的形状。细胞松弛素B对微丝的作用具有可逆性。　　考马斯亮蓝R250可以染各种蛋白,使蛋白呈蓝色。在该实验中微管等蛋白结构在光镜下无法分辨。我们看到的主要是微丝组成的应力纤维。　　体外培养的贴壁细胞应力纤维尤为发达，形态长而直，常与细胞的长轴平行并贯穿细胞全长。　　【实验用品】目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发

3、展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　1.器具：CO2恒温培养箱、倒置显微镜、超净工作台、低速离心机、普通光学显微镜、移液器、恒温箱、镊子、培养皿，载玻片、吸水纸。　　2.材料：盖片培养的成纤维细胞。　　3.试剂：PBS()、1％TritonX-100溶液、M-缓冲液、3％戊二醛固定液、％考马斯亮蓝染液、100μg/ml的细胞松弛素B、DMEM培养液。　　【实验步骤】　　1.从三张培养好的成纤维细胞贴壁生长的盖片平皿中，在超净工作台内将一张盖片移入另一平皿中继续培养，用作对

4、照。　　2.在有两片盖片的平皿内，去除培养基，用PBS洗3次，再加100μg/ml的细胞松弛素B4滴于盖片上，继续培养半小时。　　3.将用细胞松弛素B处理过的两张盖片取一张做染色处理，另一张用培养液洗五次，继续培养、观察。两小时后细胞形状恢复，接近正常。　　4.对恢复的盖片与第一张没用药的盖片一同做染色处理。　　5.染色处理：　　(1)将需染色的盖片放入盛有PBS的平皿内用吸管轻轻吹洗盖片，换液3次，每次3分钟，洗去培养液。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其

5、在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　(2)将盖片移入1％TritonX-100液处理25～30min，室温或37℃均可。以提取骨架以外的蛋白质，使骨架图像清晰。　　(3)立刻将盖片移入M-缓冲液，换洗3次，每次3min。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。　　(5)将盖片移入3％戊二醛固定10min。　　(6)将盖片移入％考马斯亮蓝染液染液中，染色15min。然后小心地用自来水冲洗，空气干燥。　　【结果与观察】　　光镜观察，微丝聚集成

6、的张力纤维束被染成蓝色，在没用药的标本上，成纤维细胞多数有突起，微丝沿突起规则排列；用细胞松弛素B处理的标本，由于微丝被破坏突起缩回。多数细胞形状变圆；用药处理后又洗去药的标本，由于解除了药的作用，肌动蛋白重新聚合成微丝，细胞形状恢复正常。　　1.光镜下观察被染成蓝色的微丝聚集成的张力纤维束。　　2.注意观察正常对照片与用药处理后的标本成纤维细胞形状的区别。　　3.观察用药处理后又洗去药的标本中细胞形态是否恢复正常。　　【注意事项】　　1.洗片时要轻柔，以免把细胞从载片上洗去。　　2.恢复时间要足够，否则细胞不会恢复到未处理前的

7、状态。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　3.操作中应注意区分细胞盖片的正反面。　　4.染色后应冲洗盖片背面，避免损伤细胞。　　5.1％TritonX-100抽提蛋白时，注意避免抽提时间过长破坏细胞结构。　　【思考题】　　1．绘出三种不同情况下细胞中微丝的分布。　　2．实验中设计对照组的作用及重要性？　　3．TritonX-1

8、00液、M-缓冲液、戊二醛及考马斯亮蓝在本实验中所起作用？　　实验一：细胞的形态观察及其大小测量　　一、实验目的：　　1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构；　　2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。　　二、实验