行业标准：BJS 201806 土豆及其制品中 α -茄碱和 α -卡茄碱的测定.pdf

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1、附件1土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱的测定BJS2018061范围本方法规定了土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱含量的液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于土豆及其制品中α-茄碱和α-卡茄碱含量的测定。2原理样品经酸化乙腈提取，用液相色谱-串联质谱仪测定，采用外标法定量。3试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯，水应为符合GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。3.1.4甲酸铵（HCOONH4）：色谱纯。3.1.5无水硫酸镁（MgSO4）：分析纯。3

2、.1.6无水乙酸钠（CH3COONa）：分析纯。3.2试剂配制3.2.1甲酸-甲酸铵缓冲溶液：称取甲酸铵（3.1.4）0.063g于烧杯中，加适量水溶解后转移到1000mL容量瓶中，再移取甲酸（3.1.3）1mL于同一容量瓶中，加水定容至刻度。3.2.2酸化乙腈：移取甲酸（3.1.3）10mL于1000mL容量瓶中，加乙腈（3.1.2）定容至刻度。3.2.3甲醇水溶液（50%，体积分数）：移取甲醇（3.1.1）500mL于1000mL容量瓶中，加水定容至刻度。3.3标准品α-茄碱和α-卡茄碱标准品的英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量详见附录A中的表A.1。3.4标准溶

3、液配制3.4.1α-茄碱和α-卡茄碱混合标准储备液（2.50mg/mL）：分别准确称取α-茄碱和α-卡茄碱标准品（3.3）各5.00mg于同一烧杯中，加入少量乙腈（3.1.3）溶解后转移至20.0mL容量瓶中，加入乙腈并定容至刻度，制成浓度为2.50mg/mL的混合标准使用液，于﹣20℃冰箱中保存，有效期3个月。4仪器和设备4.1液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI源）；4.2涡旋混合器；4.3高速冷冻离心机：转速≥10000r/min；4.4电子天平：感量分别为0.001g和0.00001g；4.5均质器；4.6具塞离心管：50mL和15mL。5试样制备与保存用均质

4、器将样品充分打碎混匀，放入分装容器中，密封并标记，于﹣20º℃以下冷冻存放。6测定步骤6.1提取和净化称取试样1g（精确至0.001g）于50mL具塞离心管中，加入5.0mL水涡旋混匀1min，再准确加入25.0mL酸化乙腈（3.2.2），涡旋混匀3min。之后，向离心管中加入2.0g无水硫酸镁（3.1.5），1.0g无水醋酸钠（3.1.6）。手动剧烈摇动30s后涡旋混匀1min。再将离心管置于离心机中，在4℃条件下以10000r/min的速度，离心8min。取全部上清液至25mL容量瓶中，加入酸化乙腈（3.2.2）至刻度，再从中取25µL上清液于5mL容量瓶中，加入甲醇水溶液

5、（3.2.3）至刻度，取1mL过微孔滤膜（0.22µm，聚四氟乙烯）后上机测定。6.2仪器测定6.2.1液相色谱-串联质谱检测6.2.1.1液相色谱参考条件a）色谱柱：C18液相色谱柱，100mm×2.1mm，粒径1.8µm，或性能相当者；b）流动相：A为甲酸-甲酸铵缓冲溶液（3.2.1），B为乙腈（3.1.2）。梯度洗脱程序见表1；c）流速：0.3mL/min；d）柱温：35℃；e）进样量：5μL。表1梯度洗脱程序时间（min）流动相A（%）流动相B（%）09550.1955359545954.595579556.2.1.2质谱参考条件a）离子源：电喷雾离子源（ESI）；b）

6、监测方式：多反应监测（MRM）；c）扫描方式：正离子模式；d）毛细管电压：3kV；e）脱溶剂气温度：500℃；f）脱溶剂气流速：1000L/h；g）锥孔气流速：50L/h。目标物的定性离子、定量离子及其碰撞能量等参数见表2。表2质谱参数化合物母离子（m/z）锥孔电压（V）子离子（m/z）碰撞电压（eV）97.9*86α-茄碱869.0100398.47097.9*90α-卡茄碱853.0100398.470注：*为定量离子6.2.2定性测定在相同试验条件下测定试样和加标试样溶液，记录试样和加标试样溶液中目标物的色谱保留时间，以相对于最强离子丰度的百分比作为定性离子的相对离子丰度

7、。若试样中检出与加标试样溶液（6.2.3）中目标物保留时间一致的色谱峰（变化范围在±2.5%之内），且其定性离子对与加标试样溶液中相应的定性离子对的相对丰度（k）相比，偏差不超过表3规定的范围，则可以确定试样中检出相应目标物成分。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度k>50%50%≥k>20%20%≥k>10%k≤10%允许的相对偏差（%）±20±25±30±506.2.3定量测定分别称取1g（精确至0.001g）样品于6个50mL离心管中，再分别准确吸取2.50mg/mL的