实验二、总糖和还原糖的测定课件.ppt

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1、实验二、总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸法目的要求掌握还原糖和总糖的定量测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法实验原理在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。实验内容葡萄糖标准曲线的制备样品中还原糖的提取和含量测定样品中总糖的水解、提取和含量测定注意事项：标准曲线制作与样品含糖量测定应

2、同时进行，一起显色和比色1、葡萄糖标准曲线制作1、取6支1.5cmm×1.5cm试管，按下表加入2.0mg/mL葡萄糖标准液和蒸馏水。管号葡萄糖标准液（mL）蒸馏水(mL)葡萄糖含量(mg/mL)A540001010.20.80.420.40.60.830.60.41.240.80.21.651022、在上述试管中分别加入DNS试剂2.0mL，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收

3、值为纵坐标，绘制标准曲线。2、样品中还原糖的提取准确称取1g藕粉，放在100mL烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入约40mL蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。3、样品总糖的水解及提取准确称取1g淀粉，放在大试管中，加入6MHCl10mL，蒸馏水15mL，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却

4、至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6MNaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100mL，过滤取滤液10mL于100mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。4、样品中含糖量的测定1、取7支15mm×150mm试管，分别按下表加入试剂：项目空白还原糖总糖0123456样品溶液（mL）11111113,5-二硝基水杨酸试剂（mL）2222222A5402、加完试剂后，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0mL，摇匀，在540nm波长处测

5、定光吸收值。测定后，取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖含量。5、计算按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL；V──还原糖或总糖提取液的总体积，mL；m──样品重量，g；1000──mg换算成g的系数。思考题1.比色时为什么要设计空白管？2.糖测定过程中的干扰物质有那些？如何除去？