植物根系(脱氢酶)活力检测试剂盒(TTC比色法)讲课教案.docx

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1、植物根系(脱氢酶)活力检测试剂盒(TTC比色法)精品文档植物根系(脱氢酶)活力检测试剂盒(TTC比色法)简介：植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力直接影响植物地上部的生长和营养状况以及最终产量，是植物生长的重要生理指标之一。TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)是一种氧化还原物质，是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶解于水为无色，可以检测根系活力。Leagene植物根系(脱氢酶)活力检测试剂盒(TTC比色法)检测原理是在弱酸性条件下，以TTC为底物，植物根系中脱氢酶能够还原TTC生成

2、红色而不溶于水的三苯基甲腙(TTF)，生成的TTF比较稳定(不会被空气中的氧自动氧化)，于分光光度计或酶标仪485nm处检测吸光度，计算TTC还原量，以该还原量表示脱氢酶活性，并作为植物根系活力的指标。该试剂盒主要用于定量测定植物根系中根系活力或脱氢酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。组成：编号名称TP102340TStorage试剂(A):TTC2×0.5gRT避光试剂(B):TTCAssaybuffer2×250mlRT试剂(C):TTC终止液100mlRT使用说明书1份操作步骤(仅供参考)：

3、1、配制TTCAssaybuffer工作液：取0.5gTTC完全溶解于TTCAssaybuffer中，即为TTCAssaybuffer工作液，即配即用，短期4℃避光保存。2、制作TTC标准曲线：取0.25mlTTCAssaybuffer工作液置于离心管或容量瓶，加入少许NaS2O4粉末(一般2mg左右，各管量一致)，混匀，产生红色的TTF，用乙酸乙酯补加至10ml，混匀。按下表，分别取上述溶液0.25、0.5、1、2、3ml置于离心管或容量瓶中，用乙酸乙酯补加至10ml，即TTF含量为的系列标准溶液，以乙酸乙酯为空白调零

4、，以分光光度计或酶标仪测定485nm处吸光度，绘制标准曲线。加入物(ml)12345收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档TTCAssaybuffer工作液0.250.5123乙酸乙酯9.759.5987相当于TTF含量(μg/10ml)25501002003001、准备样品：取植物须根系，洗净，用滤纸吸干，完全浸没于TTCAssaybuffer工作液，37℃避光孵育，加入TTC终止液。空白对照：先加入2mlTTC终止液，加入干净的植物须根系，完全浸没于TTCAssaybuffer工作液，37℃避光孵育，以次液作为

5、空白对照。2、加样：把上述根系取出，滤纸吸干水分，放入研钵或匀浆器中，加入乙酸乙酯，充分研磨或匀浆，以提取出TTF。把红色提取液转移至离心管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2-3次，再将洗涤液一并转移至离心管，最后补加乙酸乙酯至。3、根系检测：以空白调零，比色杯光径1.0cm，以分光光度计或酶标仪测定485nm处TTF吸光度。计算：以系列标准溶液TTF浓度(25μg、50μg、100μg、200μg、300μg10ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制TTF标准曲线，根据TTF与吸光度计算回归方程，根据回归方程计算出待

6、测样品的四氮唑还原量，即为根系活力或脱氢酶活性。根系(脱氢酶)活力(mg/g·h)=C×V/(1000×W×t)式中：C=根据标准曲线查得的样品提取液的浓度(μg/ml)V=样品提取液总体积(ml)W=植物须根系的重量(g)t=孵育时间(h)=1(h)注意事项：1、配制好的TTCAssaybuffer工作液应避光保存，如果见光会变红，影响实验结果。2、提高温度可以增加反应速度，但会降低重氮盐的稳定性，所以反应需在相同条件下进行。收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档1、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定

7、，但应注意酶标板每孔最大检测体积。编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CM0004LB培养基DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)相关：收集于网络，如有侵权请联系管理员删除