ttc根系活力测定方法

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1、TTC溶液的配制：取3gTTC溶于1L蒸馏水或冷开水中，配制成01％的TTC溶液。药液PH应在65～75，以PH试纸试之(如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水)。【方法】1将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水(30℃)浸泡2～6H，使种子充分吸胀。2随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。3把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。4放入30～35℃的恒温箱内保温30Min。也可在20℃左右的室温下放置40～60Min。5保温后，倾出

2、药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力植物根系活力的测定（TTC法）一、原理  氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（TTF），如下式：生成的三苯甲（TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。  二、实验材料

3、、试剂与仪器设备  （一）实验材料  水培或砂培小麦、玉米等植物根系。  （二）试剂1.乙酸乙酯（分析纯）。2.次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯），粉末。3.1％TTC溶液：准确称取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100mL。用时稀释至需要的浓度。4.磷酸缓冲液（1/15mol/L，pH7.0）。5.1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55mL，边搅拌边加入盛有500mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000mL。6.0.4mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100mL即成。  （三）仪

4、器设备  小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5mL1支、10mL1支、5mL3支，刻度试管6支，分光光度计，分析天平（感量0.1mg），电子顶载天平（感量0.1g），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。  三、实验步骤  1.定性测定  （1）配制反应液  把1％TTC溶液、0.4mol／L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。  （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有

5、脱氢酶存在。  2.定量测定  （1）TTC标准曲线的制作  取0.4％TTC溶液0.2mL放入大试管中，加9.8mL乙酸乙酯，再加少许Na2S2O4粉末摇匀，则立即产生红色的TTF。此溶液浓度为每毫升含有TTF80µg。分别取此溶液0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL置10mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF20µg、40µg、80µg、120µg、160µg的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。  （2）称取根尖样品0.5g，放

6、入小烧杯中，加入0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液（pH7.0）各5mL，使根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～2h，此后立即加入1mol/L硫酸2mL，以停止反应。（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，37℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上）。  （3）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯3～4mL，充分研磨，以提出TTF。把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为10mL，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测

7、出吸光度，查标准曲线，即可求出TTC还原量。  四、结果计算根系活力=C/(1000*W*h)[mgTTF/（g•h）]式中：C——四氮唑还原量，μg。W——根重，g。    h——时间，h。