乳酸脱氢酶（ldh）总活性终点比色法定量检测试剂盒产品说

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1、乳酸脱氢酶（LDH）总活性终点比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途乳酸脱氢酶（LDH）总活性终点比色法定量检测试剂是一种旨在通过乳酸脱氢酶反应系统中反应完成后还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用终点比色法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞和组织裂解萃取样品（动物、人体、植物、昆虫等）乳酸脱氢酶（LDH）的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景乳酸脱氢酶是一种氧化还原酶，催化丙酮酸和乳酸的互相转化反应。乳酸脱氢酶由4个亚单位构成，有两种

2、类型：肌肉型和心肌型。根据其亚单位成分，分为5种同功酶。乳酸脱氢酶的活性检测用来评价细胞或组织的损害状况。基于丙酮酸（pyruvate）底物在乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase；LDH）的催化下，转化成乳酸（lactate），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamideadeninedinucleotide；NAD），完全反应后，在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm波长）由此定量测定乳酸脱氢酶的活性。乳酸脱氢

3、酶反应系统为：lactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+（高吸收峰）（低吸收峰）产品内容缓冲液（ReagentA）5毫升反应液（ReagentB）500微升底色液（ReagentC）500微升阴性液（ReagentD）500微升产品说明书1份保存方式保存反应液（ReagentB）和底色液（ReagentC）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，底色液（ReagentC）避免光照，有效保证12月用户自备比色皿或酶标板：用于比色的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤一、测定准备1．准备好待测样品（例如细胞裂解

4、样品等），置于冰槽里2．设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长340nm，并置零3．缓冲液（ReagentA）室温下均衡温度二、背景对照测定1．移取195微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿2．加入5微升阴性液（ReagentD）3．加入25微升反应液（ReagentB）4．在25℃温度下孵育3分钟5．加入25微升底色液（ReagentC）6．上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）7．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照0分钟读数8．在25℃温度下孵育5分钟9．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照5分钟读数10．背景空对照实际读数：0分钟读数－5分钟读数三、

5、样品测定1．移取195微升缓冲液（ReagentA）到新的比色皿2．加入5微升待测样品（20微克蛋白）（注意：样品须清澈，且pH为7.5）3．加入25微升反应液（ReagentB）4．在25℃温度下孵育3分钟5．加入25微升底色液（ReagentC）6．上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）7．即刻放进分光光度仪检测，此为样品0分钟读数8．在25℃温度下孵育5分钟9．即刻放进分光光度仪检测，此为样品5分钟读数10．样品实际读数：0分钟读数－5分钟读数四、计算样品活性[（样品读数－背景读数）X样品稀释倍数X1（体系容量；毫升）]÷[0.005（样品容量；毫升）X6.22

6、（毫摩尔吸光系数）X5（反应时间；分钟）]＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克单位＝微摩尔丙酮酸/分钟五、酶标板测定1．在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照和样品2．分别移取195微升缓冲液（ReagentA）到相应孔中1．分别加入5微升阴性液（ReagentD）或待测样品（20微克蛋白）（注意：样品须清澈，且pH为7.5）2．分别加入25微升反应液（ReagentB）3．在25℃温度下孵育3分钟4．分别加入25微升底色液（ReagentC）5．轻轻摇动酶标板6．即刻放进酶标仪检测，此为0分钟读数7．在25℃温度下孵育5分钟8．即刻放进酶标仪检测，

7、此为5分钟读数9．实际读数：0分钟读数－5分钟读数10．活性计算[（样品读数－背景读数）X样品稀释倍数X0.25（体系容量；毫升）]÷[0.005（样品容量；毫升）X6.22（毫摩尔吸光系数）X0.6（厘米）X5（反应时间；分钟）]＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克单位＝微摩尔丙酮酸/分钟注意事项1．本产品为20次操作，包括背景对照2．操作时，须戴手套3．系统操作过程中，背景测定只需1次4．样品须澄清，至关重要5．比色测定后，比色皿须清洗彻底6．背景空对照0分钟读数通常0.2至0.8为理想状态7．背景空对照的正常读数差值（0分钟－5分钟）通常为