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《ttc_脱氢酶活性检测方法的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、年!月吉林建筑工程学院学报6#7(第期∀#∃%&∋(#)∀∗(+&,%−.+/−−/∃%∋(∋&01+2+(3&4+&−−%+&4∗&5/+/∃/−8∋%7一‘991脱氢酶活性检测方法的研究周春生尹军孟琳祖天明:城建系;,、生、摘要本文采用好氧消化污泥为材料对影响测定的样品前处理化培养酶反应终止、三苯:,剂荃甲月替9<;萃取剂以及萃取条件等进行了系统研究提出了检测脱氢酶活性的常温萃取法,并在废水和剩余活性污泥等生物处理研究中应用,效果良好7一,,,关键词991脱氢酶活性常温苹取法好氧消化污泥生物处理=月(∀言废水生物处理的本质是酶促反应过程7废水中有机污染物在微生
2、物酶的催化下进行氧化分解,脱氢酶活性水平高低直接关系到有机污染物的生物降解速度以及废水处理构筑物的净化效果7因此,研究和探讨脱氢酶活性检测方法,对于促进污水生物处理技术应用与推广以及加强废水生物处理运行控制都具有重要意义7,一目前国内外大多教科书和科技文献中常以991还原法测定活性污泥的生物氧化活性,该法采用高温:。℃;萃取样品显色液,再进行比色分析7然而,常用的萃取剂:如甲醇、、,,,乙醇丙酮等;沸点较低于是萃取时溶剂蒸发甚至破塞而溢致使测定结果不稳定,因此导致了这一生化分析技术在实际应用方面受到限制7另外,我们在实验中发,一,现将已有的991还原法直接引入消化污泥生化活性
3、测定方面会使显色液颜色消失或出现样品测定值低于样品空白测定值的反常现象7该项,,目针对上述两个技术难点利用间歇式运行中的好氧消化污泥为材料对影响,一消化污泥脱氢酶活性测定的主要因素进行实验研究进而提出了991脱氢酶活性常温,萃取测定法的分析程序为剩余污泥好氧消化处理的可行性研究及其运行控制提供了实验分析手段7另外,将该项研究成果在污泥好氧消化处理、转盘法处理生物制品废水、陶粒柱饮用水低温生物预处理以及生物吸附法处理高浓度含酚废水等研究中应用,其效果是令人满意的7收稿>一?一=?日期7周春生,>。岁,男,副教授,7该项研究成果,于!年,并于>≅月获吉?月通过
4、省级鉴定年林省科技进步三等奖一一基本原理在微生物生理代谢方面,物质代谢和能量代谢密切相关7细胞中能量代谢的关键一7环,Α十Β−;通过呼吸链而产生能量是细胞中有机物氧化分解的各代谢支路所产生的氢:,脱氢酶是呼吸链的主干酶系其辅酶∗:6,Χ十烟酞胺腺缥吟二核昔酸;或辅酶∗十—,:6,ΧΔ烟酸胺腺嗦吟二核昔酸磷酸;是重要的递氢体它们可以把基质氧化脱下十7,—−十−的氢:ΑΒ;传入呼吸链直至分子态氧氢:ΑΒ;在呼吸链传递过程中释放出能量用7于生物合成和维持细胞的生命活动ΑΕΒ−;之所以能够通过呼吸链最终与受氢体氧氢:结合生成水,其动力在于氧化呼吸链各组成部分的氧化还原电位的不同7:
5、图;决争∗。∋一一戒〕止坠辅酶黄素蛋白细胞色素细胞色素一一一!瓜Ε:6,Χ;一!?=ΦΓ一!=ΦΓΕ?=ΦΓ十?=ΦΓ十≅?=ΦΓ图好氧性微生物的氧化呼吸链7牙,Η,ΙΧ7,Χϑ,ΧΚ分别为与,,ΗΚ,!分别为细胞中不同的基质Η相对应的脱氢酶,,从图中可以看出细胞中有机物脱氢是生物氧化分解的关键步骤分子氧是生物,,经过氧化呼吸链传递给最终受氢体氧的氢Ε−;越多氧化的最终受氢体:ΑΒ说明脱氢酶,,ϑ7,:如Χ,!,ΧΧ;活性越高可见通过检测经氧化呼吸链传递氢的速率或强度便可判定脱氢酶活性水平的高低7生物样品脱氢酶活性测定分析的实质就是通过选用某种有机染,料作为人造受氢体
6、:也称为人造电子受体;以取代氧化呼吸链的天然最终受氢体7,?:=;由于所选用的人造受氢体的氧化还原电位较低从而可以截住传向最终受氢体的,Α:十ΑΒ−;使自身还原然后根据某些可以测定的表观现象来判断被检样品的脱氢酶活性7,,一,,一%−&−/%∋Λ#Ο本实验选用的人造受氢体为?!氯化三苯基四氮哇:Λ!9+Μ.Ν(9(+∃#−,,’−,Φ.(#%+0即991;它在细胞呼吸过程中接受Α:ΑΒ;以后其还原产物三苯基甲%−&#%∋Λ#&−7,Κ腊:9+Μ.Ν(<Φ即9<;呈现红色反应式如下7ΚΠΑ巡鱼色ΠΕϑΑ:底物;:氧化的底物;一‘Ρ一6「Θ尸甲丈少;Θ尸Σ1∗一Α1Σ心Ο少:Ε?1
7、(以Τ。Τ一仁尹ΘΕΑ仁6一6一一6一6一犬夕」犬少,,991无色9<红色,,上述反应在活性微生物细胞内进行三苯基甲腊不溶于水以红色结晶存在于细胞7,7因此:如甲醇、乙醇、丁醇以及丙酮等;萃取甲腊:内实验中通常采用有机溶剂9<;,由于甲腊溶液在波长>≅&Φ附近有吸收峰因而可以采用分光光度法于>≅&Φ处测定一?一Ο,,一其光密度进而根据标准曲线计算甲腾生成量即99Υ脱氢酶活性:Χ−.Ν0%#4−&∋5−,1,一7/+2+/Ν简称991ΧΑ,;7,7,,99。=∋/3。1在ΜΑΘςΔ一Φ条件下
