实验一培养基配制及灭菌课件.ppt

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1、实验一MS培养基的配制及灭菌实验室守则实验要穿白大褂。实验室内禁止吃食物，勿高声谈话。实验前必须认真预习，熟悉实验的内容，了解所用的仪器用具；实验中应严格按操作规程进行，认真操作、仔细观察，及时记录实验现象及结果；实验结束后仔细地分析和总结实验过程及结果，认真做好每一次的实验报告。5.使用仪器时，应严格遵守操作规程，对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作（尤其是微量移液器！）。在操作的过程中发现任何意外的现象都要及时向任课教师报告。在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾桶里，严禁随地投弃！实验器具应保

2、持清洁，例用过的玻璃器皿必须洗净后放回原处。实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。公用试剂用完后，应立即盖好放回原处。执行值日生制度，每天安排3-4人值日，其职责是负责实验器具的整理、操作台、水槽、地板等实验室卫生工作和一切服务性工作，并注意实验室的水、电、门窗等方面情况，具体由学委安排。本学期实验内容有：1.培养基母液及多种培养基配制及灭菌。2.外植体的消毒及接种技术。3.愈伤组织、芽、根的诱导、继代和分化。4.种子的无菌萌发。5.毛状根的诱导、培养及转化根的帅选。发根农杆菌的活化及扩增预培养、侵

3、染及共培养毛状根诱导毛状根除菌培养转化根的抗性帅选本实验课的基本要求掌握实验中涉及的有关的理论知识常用技术的原理实验中使用的试剂的作用实验可能达到的预期结果掌握有关的实验操作常用器具、仪器的使用方法和注意事项常用技术的实验步骤具备基本的实验方案设计能力要求：通读实验指导（附录一），预习及操作时要联系理论课的相关内容。勤思考。注意安全使用离心机要注意离心样品的平衡。微波炉内不可使用金属容器以及空载。使用灭菌锅、温箱时注意压力、温度不可超过最大限值。使用紫外线时，注意防护：不可裸眼注视，不可在紫外线下暴晒……

4、保持干净，防止污染a)称取试剂后要及时清洁。b)培养基污染后应高温灭菌后才清除。实验的注意事项c)女同学在超净工作台操作时要把长发扎起。d)进入接种室、培养室要换穿工作鞋。e)使用后的器皿必须清洁干净,放回原处。仔细、认真操作a)要独立思考，不要人云亦云。b)实验过程要及时做好记录。实验步骤1.MS培养基母液的配制大量元素(10倍2000毫升)第1、2小组配制微量元素(1000倍)老师配制铁盐(100倍100毫升)第3小组配制有机物(100倍100毫升)第4小组配制2.植物生长调节物质母液的配制(0.5m

5、g/mL，50mL)生长调节物质溶剂2，4-D95%乙醇（第3小组）NAA先用95%乙醇，再用热水溶解（第5小组）6-BA1NNaOH（第6小组）第7、8小组准备包好吸水纸及接种用具和无菌水40瓶、空瓶8个。母液种类成分规定用量mg·L－1扩大倍数称取量mg母液定容体积(ml)配1LMS培养基吸取量(ml)大量元素KNO319002038000100050NH4NO3165033000MgSO4·7H2O3707400KH2PO41703400CaCl2·2H2O4408800微量元素MnSO4·4H2O

6、22.310002230010001ZnSO4·7H2O8.68600H3BO36.26200KI0.83830Na2MoO4·2H2O0.25250CuSO4·5H2O0.02525CoCl2·6H2O0.02525铁盐Na2一EDTA37.31003730100010FeSO4·7H2O27.82780有机母液肌醇10050500050010维生素B1(盐酸硫胺素)0.15烟酸0.525维生素B6(盐酸吡多醇)0.525甘氨酸2.0100表MS培养基母液配制大量元素母液试剂称量计算公式：试剂称量＝规定

7、用量×扩大倍数×母液量（注意：称量单位要统一）生长调节物质称量计算公式：试剂称量＝母液浓度×母液量注意事项在配制母液时，按先后顺序添加各种各种无机盐，且要待前一种试剂完全溶解后才加后一种试剂。其目的是尽量避免Ca2+、SO42－和PO43－等离子形成难溶于水的盐。同时母液的扩大倍数应由低温下母液溶解程度和存放方便来决定。标签要求名称：MS大量元素扩大倍数：10×配制人姓名：×××配制日期：2010.4.21（二）配制以MS培养基为基础的固体培养基（500mL/组)1、按MS(或1/2MS)＋植物生长调节剂

8、＋3％蔗糖＋0.8％琼脂的要求称取蔗糖和琼脂(或0.7%卡拉胶)。2、按课本Page23表2－1要求和以下配方计算所需各母液的量，计算结果由同伴核实。各小组烟草培养基配方(1)MS+2,4-D2.0mg/L(2)MS+2,4-D0.5mg/L+NAA0.2mg/L(3)MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L(4)MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L(5)MS+6-BA2.0mg/L(6)MS+6-BA