【实验】培养基的配制和灭菌.ppt

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1、到目前为止几十项诺贝尔生理学和医学奖、化学奖都与微生物学有关微生物基础知识微生物的分类原核生物原生生物真菌病毒特点：结构都相当简单,个体多数十分微小。通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看清楚。专题2:微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养一、培养基作用、种类二、无菌技术三、制备牛肉膏蛋白胨培养基四、纯化大肠杆菌主要内容一、培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基。1.培养基定义：2.培养基的营养构成(1)基本成分：碳源、氮源、水、无机盐①碳源无机碳源：有

2、机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物②氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源牛肉膏又称牛肉浸膏，是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。富含：糖类、碳源、维生素、磷酸盐等蛋白胨蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分

3、解后也可形成蛋白胨。在胃内蛋白质的初步消化产物之一就是蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。富含：氮源、一些维生素(2)特殊营养：（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）(3)pH、氧气的需求维生素、碱基等例如:培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素；培养霉菌时需将PH调至酸性；培养细菌时需将PH调至中性或微碱性；培养厌氧型微生物时则需要提供无氧的条件。培养基的成分及功能据化学成分可分为：_____培养基和_____培养基据外观物理状态可分为：____培养基______培养基和____

4、_培养基据培养基功能可分为：____培养基和____培养基和基础培养基天然合成液体半固体固体鉴别培养基的类型选择3.培养基的类型和用途比较：固体培养基和半固体培养基、液体培养基。区别：加入琼脂的量决定培养基的形态。熔点：96℃凝固点：40℃注意：一般细菌不能利用琼脂。菌落选择培养基用途：从众多微生物中选择、分离出所需要的微生物原理：依据某些微生物对某些物质的抗性而设计制备方法：在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。常见选择培养基举例：加入青霉素的培养基

5、:不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基:唯一碳源为纤维素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养型微生物分解纤维素的细菌鉴别培养基用途：鉴别不同种类的微生物原理：依据微生物产生的某些代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计制备方法：在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。鉴定培养基举例：大肠杆菌在伊红美蓝培养基上典型特征大肠杆菌菌落呈黑色中心,有金属光泽4.培养基配制原则：（1）目的要明确：要根据所培养的微生物的种类、培养的目

6、的等，选择原料配制培养基。（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。（碳源和氮源的比最为重要）如：谷氨酸生产中C:N=4:1菌体大量繁殖而产生的谷氨酸少。C:N=3:1菌体繁殖受抑制但谷氨酸的合成量大增。（3）pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同。细菌pH为：6.5-7.5；放线菌pH为：7.5-8.5；真菌pH为：5.0-6.0。二、无菌技术1、获得纯净培养物的关键：防止外来杂菌的入侵2、无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；（2）将培养器皿、接种用

7、具和培养基等器具进行灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。（1）消毒定义：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）对象：操作空间、双手3.消毒与灭菌的概念使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌之过程。对象：接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等（2）灭菌的定义：(1)常用的消毒方法：4.常用的消毒与灭菌的方法煮沸消毒法:在100℃煮

8、沸5-6min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢。巴氏消毒法：在70-75℃煮30min或80℃煮15min可以杀死不耐高温的液体中的微生物，并且使液体中的营养成分不被破坏。（如牛奶）化学药剂消毒法:用70%的酒精擦拭进行皮肤消毒;用氯气消毒水源等。紫外线消毒……灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。(2)常用的灭菌方法：干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160～170OC中加热1～2h即可。(2)常用的灭