【实验】培养基的配制和灭菌.pptx

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1、课题1微生物的实验室培养专题2微生物的培养与应用1.提供合适的营养和环境条件2.防止其他微生物污染2.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐3.特殊营养：（有些微生物需要）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）4.pH、氧气、二氧化碳、渗透压的需求：一、培养基如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、碱基等)按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。1.概念：不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质合成生物体的细胞物质和一些代谢产物；有些是异养生物的能源物质氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、

2、核酸以及含氮的代谢产物①无机化合物：CO2、NaHCO3等。②有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油、牛肉膏、蛋白胨等①无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐。②有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等自养微生物异养微生物注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源，如牛肉膏硝化细菌营养物质定义作用主要来源生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分无机盐矿物质参与酶的组成；调节渗透压——水——作为溶剂和运输的介质；参与生化反应——牛肉膏、酵母膏、动物组织提取液等备注：(1)不同种类的微生物，对碳源的需要差别较大。(2)微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最

3、常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。(3)对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源和能量来源。(4)微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分天然培养基合成培养基用途或功能鉴别培养基培养基的种类不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产，增加某某菌的浓度或产物微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微

4、生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基固体培养基划分标准培养基种类特点用途物理性质培养基的种类不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产，有利于微生物的大量繁殖，从而增加某某菌的浓度或产物、显微直接计数法微生物分离、鉴定、培养菌落，进行活菌计数、保藏菌种、动植物的组织液体培养基固体培养基平板划线法，用于微生物的分离（简单）稀释涂布平板法，用于微生物的分离(复杂),活菌计数在固体培养基上的接种方法？？？加入青霉素(是抗生素，杀细菌)的培养基:不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基:几种选择培养基举例：分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养型微生物唯一碳源为纤维素的培养基分解纤维素的细

5、菌1.无菌范围：实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程2.消毒与灭菌?酒精灯旁操作超净工作台关键是防止外来杂菌的污染二、无菌技术耐高温需保持干燥的物品，160～170℃1～2小时接种环、接种针等金属用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100KPa、121℃、15～30min关键是防止外来杂菌的污染2.消毒与灭菌：二、无菌技术四、大肠

6、杆菌的纯化培养分散成单个细胞,形成单个菌落3.功能：单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体(菌落)1.定义：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿倒平板约50℃倒置：防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基倒置1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能

7、用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。思考讨论