实验八：培养基的配制和灭菌.doc

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1、实验八：培养基的配制和灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。2.学习几种常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法。3.进一步熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。二、实验材料1.药品及试剂:可溶性淀粉,KN03,K2HP04・3H20,MgS04・7H20,FeS04・7H2O,lmol/LNaOII,琼脂，牛肉膏，蛋白豚，NaCl2.仪器及其它：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（5、5-9、0）、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养1111、涂布棒、吸管（lml）.玻璃珠、PH试纸三、实

2、验内容和方法（一）实验内容1.分纟R配制高氏一号培养基300mlo配方：可溶性淀粉20g、NaCl0.5g.KN03lg、K2HP04・3H200.5g、MgS04・7H200.5g、FeS04・7H20O.Olg、琼脂15-25g、水lOOOmKpH7、4-7、62.配制牛肉膏蛋白腺培养基配方：牛肉膏3g、蛋白腺10g、NaCl5g、水lOOOinl.PH7.4-7.63.配制米汁培养基配方：大米3斤，水12斤，获曲225克，糖化酶1.5克（二）方法步1•称量按培养基配方比例依次准确地称取药品。可溶性淀粉先用少量热水溶化后再加入其他成份，补足所需水分，混匀示加入琼

3、脂。2•熔化在沸水浴锅屮加热熔化。3•调pH用lmol/LNaOH调pH至7、4-7、6。4•过滤趁热用多层纱布过滤（本实验米汁培养基需过滤）5•分装将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，注意管口不要沾上培养基。液体分装装最不超过试管的1/4,固体分装装量不超过试管的1/5,分装二角瓶的量不超过三角瓶容积的一半，半固体分装装量为试管的1/3,灭菌后垂直待凝。6•加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能，然后包扎一层牛皮纸。试管应先捆成一捆示再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、

4、LI期、组别。7•灭菌将培养基放入高压蒸汽灭菌锅内，1、05kg/cm2压力，121、3°C,20min湿热灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。8•摆斜面灭菌完毕，将试管培养基冷至5CTC左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上,搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。9•检验灭菌效果将火菌的培养基放入37°C的温室屮培养24〜48h,以检杳火菌是否彻底。四、作业要求1•培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养菌是无菌的？2.加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？2.管口

5、、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么？