实验五 培养基的配制和灭菌.doc

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1、实验五培养基的配制和灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。2.学习常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法。3.熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。二、实验器材1•药品及试剂马铃薯，葡萄糖，琼脂，牛肉骨，蛋白月东，NaCI,无菌水2.仪器及其它试管、三角瓶、烧杯、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、棉花、旧报纸、麻绳、纱布、培养皿三、实验内容1•实验分组食科0901本29人/班->7人/组，分4组2.培养基配方配方一：马铃薯培养基200mI培养酵母菌用马铃薯水煮液40g、

2、葡萄糖4g、琼脂4g、水200mKpH自然马铃薯去皮装于烧杯中，进行煮沸，用四层纱布过滤于三角瓶中，再加糖和琼脂补水至200ml121°C灭菌20min己方二：普通营养琼脂培养基150ml-培养大肠杆菌、枯草芽砲杆菌用蛋白月东10g、牛肉膏10g、氯化钠5g、琼脂20g分装于10支试管中（试管1/5体积装液量）121°C灭菌20min四、实验方法、步骤（一）试管、锥形瓶及培养皿清洗1人/组（-）棉塞制做1人/组（三）培养基制作1人/组1、马铃薯培养基削皮f切片f称量一装于烧杯中煮沸一纱布过滤于三角瓶一加

3、糖、琼脂融化一补无菌水至200ml2、普通营养琼脂培养基称量一熔化均一一分装（试管1/5体积装液量）（四）加棉塞培养基配制完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。（五）试管与三角瓶包扎试管5个/扎用橡皮筋捆成一捆，三角瓶在棉塞外包扎旧报纸（学会活结打法），贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。（六）培养皿包扎8套/包.组（七）灭菌锅的使用将包扎好的培养皿，装有培养基且包扎好的试管与三角瓶放入高压蒸汽灭菌锅内，121°C,20min高压蒸汽灭菌。

4、（八）摆斜面灭菌完毕，将试管培养基冷至50°C左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上，搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。（九）检验灭菌效果将灭菌的培养基放入室温中培养24〜48h,以检查灭菌是否彻底。五、实验结果六、思考题1.灭菌在微生物实验操作中有何重要意义？2.在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不安全的因素？3.管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么?实验六微生物菌种的接种技术一、实验目的1•掌握无菌操作的基本环节。2.在规定的时间内完成一定数量的接种任务。

5、二、实验器材1.菌种：①细菌：大肠杆菌、枯草芽孑包杆菌②酵母菌2•基质：①普通营养琼脂培养基②马铃薯培养基3.接种工具：接种环、酒精灯、无菌操作台三、实验内容实验原理：接种中始终保持无菌操作，所用器具必须灭菌，接种前后接种针要灭菌，在火焰周围接种，棉塞也要灭菌。四、实验方法、步骤（-）接种前准备：1、查接种工具2、贴标签：菌名、姓名、日期3、无菌操作台的灭菌:使用前打开紫外灯灭菌半小时（-）接种操作要点：1、双手用75%酒精標手。2、接种环在灭菌开始在火焰上缓慢地来回至少三次°如果连续接种，而且接种环没

6、放下,则来回一次就可以了。3、接种时，刚过火焰灭菌的接种环，热度高，不能直接挑取菌种，应在没有长菌的培养基部分接触一下，使快速冷却后，挑取原菌少许，可以避免烫死原菌。原菌移出试管后,动作要快速准确，但必须不碰及管壁，更不可以直接通过火焰。4、棉塞不乱放，再塞时必须松紧适宜。5、接种环使用后须经火焰灭菌后，才能放在桌上。（三）实验步骤（1）有四个无菌操作台均已灭菌，两个操作台倒平板后接种酵母菌，一个操作台接种大肠杆菌，一个操作台接种枯草芽孑包杆菌。（2）学习倒平板技术右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用左

7、手将瓶塞轻轻地拔出，瓶口对着火焰，然后用右手手撑边缘或小指与无名指夹住瓶塞（如一次性用完培养基则没必要用手指夹住），左手拿培养皿将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml,加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。（3）学习接种技术A、大肠杆菌、枯草芽砲杆菌的接种步骤1、操作前双手用75%酒精檳手，待酒精挥发后点燃酒精灯。2、将菌种和斜面斜面握在左手的大拇指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面朝上，并处于水平位置。3、先将斜面和菌种棉塞旋转一下，以便接

8、时便于拔除。4、右手拿接种环，拿的方式和普通拿笔一样。将要伸入试管部分的金属柄和金属丝在酒精灯火焰上灼烧灭菌。5、用右手小指、无名指及手掌将菌种管和斜面管的棉塞同时拔除，并把棉塞握住，不得任意放在台上或者与其他物品接触。6、接种环在没有长菌的培养基部分接触一下，使快速冷却后，挑取菌种少许，将接种环自菌种管内抽出，抽出时勿与壁碰，也不可过火焰。7、迅速在斜面上，自上而下曲折划线，使菌体沾在培养基上，划线时勿用力，否则会划破培养基。8、接种完毕