培养基配制及灭菌

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1、广东食品药品职业学院实训教学教案（2010～2011学年第一学期）课程名称食品微生物检验技术实训项目培养基的配制与灭菌技术课时2教学对象10食品安监1-4授课日期12月3日教材王瑞兰主编《食品微生物检验技能实训教程》，本院自编（2010年8月）教师姓名王瑞兰教学方法演示法、练习法实训形式2人一组实验实训中心签字实训目的1、了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制的基本程序。2、熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。3、熟悉玻璃器皿的包扎方法。4、了解高压蒸气灭菌的原理与方法。教学内容与要求内容：1、固体、液体培养基的配制2、玻璃器皿的包扎方法要求：1、了解培养

2、基的配制原理和方法，掌握其配制的基本程序2、熟悉玻璃器皿的包扎方法3、了解高压蒸气灭菌的原理重点难点培养基的配制的基本程序仪器天平、称量纸、玻璃纸、药匙、精密pH试纸、量筒、试管、锥瓶、玻璃棒、烧杯、培养皿、1ml吸量管、涂布棒、试管架、铁丝筐、棉花、线绳、报纸、灭菌锅等。试剂蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、营养肉汤培养基、1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液。5教学过程设计教学过程设计[板书]一、实训目的1、了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制的基本程序。2、熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。3、熟悉玻璃器皿的包扎方法。4、了解高压蒸气灭菌

3、的原理与方法。[板书]二、实训原理（一）培养基的配制1、培养基：是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。它是微生物接种、分离培养的基础。2、培养基的配制原则：①适宜的营养成分；②适宜的pH值；③适宜的渗透压；④合适的物理状态3、培养基的分类按物理状态：液体培养基、固体培养基和半固体培养基。（二）高压蒸气灭菌利用加热一个密闭的加压灭菌锅，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。一般培养基用0.1Mpa，121.5℃，15～30min[

4、板书]三、实训步骤（2人一组）（一）培养基配制基本程序原料称量→溶解→调pH值→加琼脂熔化，补水（固体培养基用）→过滤（可以省去）→分装→加塞包扎、做标记→灭菌→摆斜面或倒平板1.称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。2.溶解用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中（做标记），在电热套中小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。53.调节pH根据培养基对pH的要求，用1mol/LNaOH或1mol/LHC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸4.

5、溶化琼脂固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂和剩余水量加入后（做水的刻度标记），置电热套中一面搅拌一面加热煮沸，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。5.过滤分装先将过滤装置安装好。如果是液体培养基，玻璃漏斗中放一层滤纸，如果是固体或半固体培养基，则需在漏斗中放多层纱布，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过滤后立即进行分装。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞，引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装

6、量以不超过三角瓶容积的一半为宜。6.包扎标记培养基分装后加好棉塞，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备班级、组别和日期等。（二）培养基的配方及本次实验的需要量1、营养肉汤培养基（培养细菌）每组配制50ml，直接称取营养肉汤培养基18g水1000ml1）计算与称量：根据需求计算各成分的量，并准确称量2）配制：直接称取营养肉汤培养基0.9g,，加热溶解于50ml 蒸馏水中，调节pH值至7.0～7.2。分装两支试管，15-20ml/支，加棉塞、包扎， 121℃高压灭菌 15min备用。2、营养肉汤琼脂培养基（细菌的分离培养，观察菌落）每组配制180m

7、l牛肉3g(0.6g)蛋白胨10g(1.8g)NaCl5g(0.9g)琼脂15～20g(3.2g)蒸馏水1000ml(180ml)1）计算与称量：根据需求计算各成分的量，并准确称量2）配制：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，然后用51mol/L的氢氧化钠或者1mol/L的盐酸，校正pH至7.2～7.4。再加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化，补水定容。分装4支试管和2个锥瓶，试管装量为10ml/支，锥瓶装量为55ml/瓶，加棉塞、包扎， 121℃高压蒸气灭菌15min。　　（三）分离培养微生物常用器皿的准备1、玻璃仪器的清洗：培养皿6套，1ml吸量管2支