抗原抗体检测技术.pdf

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1、抗原抗体检测技术抗原与相应的抗体在体外相遇时可发生特异性结合，呈现某种反应现象。根据抗原的物理性状及参与反应的物质不同可以分为凝集反应、沉淀反应及补体参与的各种反应等。一、直接凝集在玻片或其它支持物上，颗粒性抗原（细胞、细菌等）与相应抗体在有适量电解质存在时，直接结合可形成肉眼可见的凝集块。该方法简便，快速，为定性试验，常用于鉴定抗原。（一）玻片凝集-ABO血型鉴定根据人红细胞表面ABO血型抗原和人血清中ABO抗体，可将人血型分为A型、B型、O型和AB型。A型：有A抗原，抗B抗体；B型：有B抗原，抗A抗体；AB型：有A和B抗原，无抗A抗B抗体；O型：无A和B抗原，有抗

2、A和抗B抗体。检测红细胞表面ABO血型抗原，标本为红细胞，称为正定型。检测人血清中抗A、B抗体，标本为血清，称为反定型。1、正定型⑴材料：①红细胞标本：采静脉血。②抗体试剂：抗A、抗B血型抗原单克隆抗体（血凝效价256，亲合性少于15秒）。③生理盐水。④器材：玻片、小试管、小巴氏管、小吸球、无菌注射器、止血带、牙签、记号笔、酒精棉球、碘酒棉球等。⑵方法：①取一块玻片或瓷砖片，按下表标记划格，每块板可以检测5人。红细胞标本试剂12345抗A抗体抗B抗体抗原型别②取试管，装入1ml生理盐水。皮肤消毒后，静脉抽血1ml，滴2滴入试管中（余下静置，留取血清，做反定型用），混匀

3、。③取盐水稀释后的血液滴在玻片的相应上下格中，各1滴。④滴抗A、抗B单克隆抗体试剂各一滴于相应的上下格中，立即用牙签搅匀红细胞及抗体。搅抗A和抗B格时要用牙签的不同端。⑤5秒钟内就可形成凝集物。要在3分钟内观察结果并记录。出现凝集的记＋，无凝集的记－，出现凝集的即为该标本所有的ABO血型抗原。2、反定型⑴材料：①红细胞试剂：ABO同型血2～3人份混合，生理盐水洗涤3遍后，制备成2%红细胞生理盐水悬液。②被检血清标本：见正定型方法2。③用正定型材料（3）和（4）。⑵方法：①玻片或瓷砖片，按下表标记划格。血清标本红细胞12345A型B型抗体型别②取血清标本分别滴入上下相应

4、2个格中，各1滴。③分别滴A和B型红细胞于相应格中。④立即用牙签搅匀血清和红细胞。用牙签的不同端搅匀A和B红细胞。⑤3分钟内观察结果，出现凝集的记为＋，无凝集的记为－，出现凝集者即为血清中含有的ABO抗体。3、试验结果判定：红细胞标本1234抗A＋－－＋抗B－＋－＋血清标本A细胞－＋＋－B细胞＋－＋－血型ABOAB（二）试管凝集原理：在试管中，颗粒性抗原（细胞、细菌等）与相应抗体在有适量电解质存在时，直接结合可形成肉眼可见的凝集块。应用：⑴用已知的病原菌为抗原，与病人血清作定量细菌凝集试验，辅助诊断某些疾病，如：诊断伤寒、副伤寒病的肥大氏反应（Widaltest）,诊

5、断斑疹伤寒的外-裴氏反应（Weil-Felixtest）。⑵用红细胞凝集试验测定免疫溶血性疾病等人体内血型抗体的效价⑶鉴定人ABO血型单克隆抗体试剂的效价，要求ABO血型抗A抗B单克隆抗体试剂凝集效价≥256。1、血型抗体凝集效价测定⑴材料：①人A型、B型红细胞悬液（一周内采集，无溶血）。②单克隆抗体试剂：抗A、抗B单克隆抗体各一支。③生理盐水、小试管、吸球、吸管、试管架等。⑵方法：①取小试管10支，编号，置试管架上。②用1ml吸管吸生理盐水0.9ml于第一管中，其余管中加入生理盐水0.5ml.③用1ml吸管吸抗A或抗B试剂0.1ml于第一管中，反复吹吸三次，防止起气

6、泡，混匀后吸出0.5ml注入第二管，同样混匀后吸出0.5ml注入第三管中，以此类推，稀释至第九管，第九管混匀后弃去0.5ml，第十管不加抗体试剂。④每管中加入2%A型或B型红细胞悬液各0.5ml。⑤混匀后，37℃放置2小时以上，观察结果。试管凝集操作及结果举例试管号12345678910生理盐水ml抗体(血清)ml抗原(红细胞)ml0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5血清稀释度20408016032064012802560512037℃放置2小时以上结果举例4＋4＋4＋3＋3＋2＋2＋1＋±－⑶结果判定：①第十管为阴性对照，应无凝集现象。②凝集

7、程度以4＋、3＋、2＋、1＋、±、－表示。4＋：血球全部凝集，成1至2块，上清澄清。晃动时，凝集物成片状分散。3＋：血球绝大部分凝集，成大块拌数小块，或数个小块，上清较澄清。2＋：血球约半数凝集，成清楚的小凝块。上清略澄清。1＋：血球少数凝集，成肉眼可确定的小凝块。±：血球很少数凝集，肉眼难判定，光镜下可见凝块。－：无凝集，血球沉淀成边界清楚的圆点，晃动时，分散均匀。③血型抗体凝集效价判定：以肉眼可见凝集（1＋）的血型试剂最高稀释倍数为该试剂凝集效价。表中列举的血型试剂效价为2560。二、间接凝集-抗链球菌溶血素O抗体的检测将小分子可溶性抗原（激素、