抗原抗体检测技术课件.ppt

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1、抗原抗体检测技术毕建虹主要内容抗原抗体反应的原理抗原抗体的反应特点影响抗原抗体反应的因素抗原抗体反应的类型抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）是抗原与相应抗体的特异性结合反应。既可在体内作为体液免疫应答的效应机制自然发生，也可在体外作为免疫学实验的结果出现。由于抗体主要存在于血清中，且临床上多用血清标本进行实验，所以体外实验中的抗原抗体反应曾被称作血清学反应（serologicalreaction）。第一节抗原抗体反应的原理抗原抗体反应可分为两个阶段第一为抗原与抗体发生特异

2、性结合的阶段，仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应。第二为可见反应阶段，抗原抗体复合物在环境因素（如电解质、pH、温度、补体）影响下，进一步交联和聚集，表现为凝集、沉淀、溶解、补体结合介导的溶解现象等肉眼可见的反应；此阶段往往需要数分钟至数小时。亲水胶体转化为疏水胶体抗原抗体的结合使电荷减少或消失，电子云也消失，蛋白质内亲水胶体转化为疏水胶体。加上电解质（如NaCl），则进一步使疏水胶体物相互靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。抗原抗体结合力抗原和抗体通过非共价键结合，虽是互补性的特异性结合，但并不形成牢固

3、的共价键。抗原与抗体这种弱的结合力与静电引力、范德华引力、氢键结合力、疏水作用力相关。抗原与抗体之间高度的互补结构恰好为这些结合力的发挥提供了条件。第二节抗原抗体的反应特点特异性抗原抗体的结合实质上是抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合。如果两种不同的抗原物质具有部分相同或类似结构的抗原决定表位或者抗原抗体构型部分相同，则会出现交叉反应（crossreaction）。比例性（proportionality）比例性指抗原与抗体发生可见反应需要合适的量比关系，只有当二者浓度比例适当，才能形成较大的抗

4、原抗体结合物。把最迅速出现可见反应时的抗原抗体浓度比或量比称为抗原抗体反应的最适比（optimalratio）或称等价比（equivalencepoint）。因抗原抗体比例不合适而不出现可见反应，称带现象（zonephenomenon）。抗体过量时称为前带（prozone）。抗原过量时称为后带（postzone）。当抗原或抗体为单价，不管抗原与抗体的量比关系是否合适，均不能出现可见反应现象。抗原抗体结合的比例性（带现象）可逆性抗原抗体复合物解离取决于抗体对相应抗原的亲和力和环境因素对复合物的影响。亲和

5、性（affinity）是抗体分子上一个抗原结合部分与对应抗原决定簇之间的相适性而存在的引力，是抗原与抗体间固有的结合力。亲和力（avidity）指反应系统中复杂抗原与相应抗体之间的结合能力。亲和力与亲和性有关，也与抗体的结合价和抗原有效决定簇数目有关。IgG为2价，其亲和力为单价的102倍；而IgM为10价，其亲和力为单价的106倍。亲和力越大，抗原抗体结合越牢固。抗体与抗原结合是可逆反应，高亲和性抗体的抗原结合点与抗原表位在空间构型上非常合适，两者结合牢固；低亲和性抗体与抗原形成的复合物较易解离，解

6、离后的抗原或抗体均能保持未结合前的结构、活性及特异性。第三节影响抗原抗体反应的因素反应物自身因素抗原抗原的理化性质、抗原决定簇数目和种类均可影响抗原抗体反应的结果。抗体不同动物免疫血清反应性有差异特异性和亲和力共同影响实验结果的准确程度抗体的浓度环境条件电解质抗原抗体结合后由亲水胶体变为疏水胶体，易受电解质影响。若无电解质存在，则不出现可见反应。但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质沉淀，即盐析。酸碱度pH过高或过低都可影响抗原和抗体的理化性质。抗原抗体反应一般以pH6~9为宜。温度抗原抗体反应

7、最适温度为37℃有些特殊抗原抗体反应需要特定温度，如冷凝集在4℃时与红细胞结合，20℃以上反而解离。此外适当振荡与搅拌，可促进抗原抗体分子的结出，加速反应。第四节抗原抗体反应的类型凝集反应（agglutinationreaction）凝集反应是指细菌、红细胞等颗粒性抗原或表面覆盖抗原（或抗体）的颗粒状物质（如红细胞、聚苯乙烯乳胶等）与相应抗体（或抗原）结合，在一定条件下形成肉眼可见的凝集团块现象。凝集实验是一个定性检测方法，即根据凝集现象的出现与否判定结果阳性与阴性。也可以进行半定量检测，即将标本作一

8、系列对倍稀释后进行反应，以出现阳性反应的最高稀释度作为滴度。凝集反应的类型直接凝集反应颗粒性抗原在适当电解质参与下，直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象，成为直接凝集实验（directagglutinationtest）。反应中的抗原称为凝集原（agglutinogen）。参与反应的抗体称为凝集素（agglutinin）。玻片凝集实验为定性实验方法主要用于菌种鉴定和血清型分型，也用于人类红细胞ABO血型鉴定。试管凝集实验为半定量实验方法通常以产生明显