叶绿体的分离与荧光观察课件.ppt

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1、叶绿体的分离与荧光观察目的要求基本原理实验用品方法与步骤实验结果实验报告实验目的1．通过植物细胞叶绿体的分离了解细胞器分离的一般原理和方法2．了解荧光显微镜的使用原理和方法3．观察叶绿体的自发荧光和次生荧光实验原理将组织匀浆后悬浮在等渗的介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。在一给定的离心场中同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间就能使非均一悬浮液中的颗粒按照大小、密度先后沉降在离心管底部。荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观测的一种技术。某些物质在一定短波长的光的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时能在短时间内

2、放射出比照射波长更长的光（如可见光），称为荧光。有些生物体内物质受激发光照射后可直接发出荧光，称自发荧光，如叶绿素的火红色材料本身不发荧光，但吸收荧光染料后同样也能发荧光，称次生荧光，如叶绿体吸收吖啶橙后发的橘红色荧光。实验方法1．选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗及粗脉，称40克于150ml0.35mol/lNaCL中，装入组织捣碎机低速匀浆5min，将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。然后用手动匀降器手动匀浆2到3min。2．取滤液4ml在1000r/min下离心2min，弃取沉淀3．将上清液在3000r/min下离心5min，弃上清，沉淀即为叶绿体（混有部分

3、细胞核）4．将沉淀用0.35mol/lNaCL溶液悬浮5．取叶绿体悬液一滴滴于载片上，加盖片后可在光学显微镜和荧光显微镜下观察①在普通光镜下观察②在荧光显微镜下观察③滴加一滴0.01%吖啶橙荧光染料，荧光显微镜下观察实验结果普通光镜下可看到叶绿体为绿色橄榄形，高倍镜下可看到叶绿体内部有较深的小颗粒，就是基粒。荧光显微镜下叶绿体发火红色荧光，加吖啶橙后发出橘红色荧光，其中混有的细胞核则发绿色荧光。实验报告1、观察叶绿体的形态结构,测量5~10个叶绿体的长轴和短轴求其平均值。2、记录荧光显微镜下观察的叶绿体自发荧光和次生荧光现象，分析结果。细胞的凝集反应目的要求基本原理实验用

4、品方法与步骤实验结果实验报告实验目的理解凝集素使细胞发生凝集反应的原理，观察细胞的凝集现象。实验原理细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为：细胞之间的联系，细胞的生长的分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。凝集素（lectin）是一类含糖的（少数除外）并能与糖专一结合的蛋白质，它能具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用，凝集素使细胞凝集是由于他与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。实验用品1、材料：土豆块茎2、器材和仪器：显微镜，粗天平，载玻片，滴管2支，离

5、心管2支。3、PBS缓冲液称取NaCl7.2g，Na2HPO41.48g，KH2PO40.43g，用蒸馏水定容至1000ml，调pH为7.24、2%的红细胞以无菌方法抽取甲鱼血（加抗凝剂），用生理盐水洗5次，每次离心2000rpm，5min；之后按红细胞压积（红细胞在血液中所占的容积比值称为红细胞压积）用生理盐水稀释为2%的红细胞悬液。实验方法1、土豆凝集素的制备称取去皮土豆块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中即含有可溶性土豆凝集素。凝集反应用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞悬液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20min后于低倍镜下观察血球凝集现象。

6、以PBS液加2%红细胞悬液作对照实验。实验结果相较于对照，加上凝集素后，许多鸡红细胞凝集在一起结成球状。实验报告简图表示红细胞凝集原理。细胞膜的渗透性目的要求基本原理实验用品方法与步骤实验结果实验报告实验目的1了解细胞膜的渗透性2了解各物质进入红细胞的速度实验原理当红细胞置于不同等渗溶液中时，由于对各种溶质的通透性不同，因此有的溶质分子可透入，有的溶质分子则不能透入，能透人的溶质分子的速度也不同。当溶质分子进入红细胞使细胞内溶质浓度增加时，导致水的摄人。红细胞膨胀到一定程度时，细胞膜破裂，即红细胞发生溶血.由于溶质透人速度不同，溶血时间也不同。实验用品试剂：0.17mol

7、／L氯化钠，0.17mol／L氯化铵，0.17mol／L硝酸钠，0.12mol／L硫酸钠，0.12mol／L草酸钠，0.12mol／L醋酸钠，0.32mol／L葡萄糖，0.32mol／L甘油，0.32mol／L乙醇，0.32mol／L丙醇。仪器：显微镜，载玻片，盖玻片，吸管，小烧杯，试管，试管架实验方法1、低渗溶液：取试管1支，加入10mL蒸馏水，然后再加入1mL稀释的鸡血，注意观察溶液的颜色变化，溶液由不透明的红色变为红色透明，红细胞发生破裂，造成所有红细胞溶血，使光线容易通过。显微镜下观察溶血前后红细胞的形态。2、鸡血红细