叶绿体的分离与荧光观察.ppt

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1、叶绿体的分离与荧光观察NO.12016.3.28细胞生物学实验实验目的通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法。观察叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。实验原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。低速离心中速离心高速离心超高速离心细胞匀浆细胞核仁细胞骨架大细胞器小细胞器核糖体大分子叶绿体的分离应在等渗溶液中进行,以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。因为叶绿体有自发荧光，因此用荧光显微镜进行观察。实验用品材料新鲜菠菜。试剂0.35mol/L氯化钠溶液，0.01%吖啶橙(acridineorange)。器材(1)主要设备:普通离心机

2、、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。(2)小型器材:烧杯,量筒,滴管,刻度离心管,纱布，无荧光载片和盖片。实验方法一、叶绿体的分离与观察1.选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml0.35mol/LNaCl溶液中，装入组织捣碎机。2.低速匀浆3~5min。3.将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。4.每组取滤液4ml，1000r/min下离心2min，弃去沉淀。5.将上清液在3000r/min下离心5min，弃去上清液，沉淀即含叶绿体(混有部分细胞核)。6.将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。7.取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜

3、下观察。(1)在普通光镜下观察。(2)在荧光显微镜下观察叶绿体的直接荧光。(3)在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光：取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上，再滴加一滴0.01%吖啶橙荧光染料,加盖片后即可在荧光显微镜下观察。实验方法二、菠菜叶手撕片观察轻轻撕取新鲜嫩菠菜叶的表皮，展平置于载玻片上，滴加1~2滴0.35mol/LNaCl溶液，加盖片后置显微镜下观察。(1)在普通光镜下观察。(2)在荧光显微镜下观察其直接荧光。(3)观察其间接荧光：向所制手撕片上滴加1~2滴0.01%吖啶橙染液，染色1min，洗去余液,加盖片后即可在荧光显微镜下观察其间接荧光。实验结果一、叶绿体的分离和观察二、菠菜叶手

4、撕片观察作业1.在荧光显微镜下，观察叶绿体的自发荧光时，更换滤镜系统，叶绿体的颜色是否有变化？2.游离叶绿体和整体细胞内的叶绿体，在荧光显微镜下，其颜色和强度有无差异？为什么？