果糖,葡萄糖含量的测定(HPLC).doc

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1、果糖，葡萄糖含量的测定（HPLC）1原理同一时刻进入色谱柱的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解，吸附，渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱两相之间进行反复多次的分配。由于各组分在色谱柱中的移动速度不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开来。按顺序流出色谱柱，进入信号检测器，在记录仪上或数据处理装置上显示出各组分的谱峰数值。根据保留时间对照定性，依据峰面积用外标法定量。2范围本方法适用于高果糖浆及果糖和葡萄糖中间体样品3仪器与试剂3.1高效液相色谱仪（配有示差折光检测器和柱恒温系统）。3.2流动相真空抽滤脱气装置及0.2µm，0.45µm微孔膜。3.3色谱柱：阳离子

2、交换树脂柱（填充粒径：5µm；柱尺寸：Ф7.8mm×300mm）或氨基键合柱（填料粒径：5µm；柱尺寸：Ф4.6mm×250mm）或同等分析效果的色谱柱。3.4分析天平：精度0.1mg。3.5微量进样器：50µl。3.6水：二次蒸馏水或超纯水。3.7乙腈：色谱纯（氨基柱用）。3.8葡萄糖，果糖，麦芽糖，麦芽三糖的标准品，纯度应为95%以上，用每种糖的标准品在0.5mg/ml-10mg/ml范围内配制6个不同浓度的标准液系列。4操作程序4.1样液的制备称取样品0.5g（以干物质计，应使各种糖组分含量在标准液系列范围内，否则可适当增加或减少取样量），称准至0.0001g。加水溶

3、解，移入50ml容量瓶中并用水定容至刻度。用0.2µm或0.45µm水相微孔膜过滤，滤液备用。4.2色谱条件换树脂柱：流动相为纯水。在测定的前一天接通示差折光检测器电源，预热稳定。装上色谱柱，调柱温至85℃，以0.1ml/min的流速通入流动相平衡过夜。正式进样分析前，将所用流动相输入参比池20min以上。恢复正常流路使流动相经过样品池，调节流速至0.5ml/min。走基线，待基线稳定后即可进样，进样量为10µL--20µL。4.3绘制标准曲线糖，果糖，麦芽糖，麦芽三糖的标准液系列分别进样后，以标样浓度对峰面积作标准曲线。线性相关系数应为0.9990以上。4.4样品的测定将

4、制备好的样液进样。根据标准品的保留时间定性样品中各种糖组分的色谱峰。由样品的峰面积，以外标法计算各种糖组分的百分含量。4.5结果计算样品中各种糖的含量按下式计算，数值以%表示。Xi=Ai×ms×V×100As×m×Vs式中：Xi—样品中某种糖分的百分含量(质量分数，占干物质)，%；Ai—样品中某种糖分的峰面积；ms—标准样品中某种糖分标准品的质量的数值，单位为克（g）；V—样品的稀释体积的数值，单位为毫升（mL）；As—标准样品中某种糖分标准品的峰面积；m—样品的质量（以干物质计）的数值，单位为克（g）；Vs—标准样品稀释体积的数值，单位为毫升（mL）计算结果保留至整数。4

5、.6精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的5%。