牛PAF,ELISA试剂盒双抗夹心elisa实验的原理.doc

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1、牛PAF,ELISA试剂盒双抗夹心elisa实验的原理牛PAF,ELISA试剂盒双抗夹心elisa实验的原理1. 抗体类型单克隆抗体和多克隆抗体都能够用于ELISA，实际上有时候二者结合效果更好。例如，对于双抗夹心法而言，用多抗进行捕获而单抗进行有时更有帮助。多抗能够确保捕获所有抗原，随后单抗再特异性拥有特定抗原表位的抗原。双抗夹心法ELISA中捕获抗体与抗体（不论多抗还是单抗）的配对很有讲究。我们不希望捕获抗体与抗体竞争抗原上的同一位点，为此我们就需要确保捕获抗体和抗体所识别的抗原表位不存在重叠。如果捕获抗体和抗体之间发生了冲突，就会对实验结果产生较大影响。

2、要避免这一问题，我们可以选择购买“matchedpair”的捕获/抗体对，这些打包在一起的抗体是商家经过验证才推荐的好组合。2. 实验类型ELISA试剂盒有多种类型，不过它们都有一个共同特点，就是进行抗原捕获。一般捕获形式包括将抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗体进行捕获。In-cell ELISA和酶联免疫斑点ELISPOT是两种特殊的类型，In-cell ELISA需要将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化，然后再用抗体原位。ELISPOT有点像蛋白印迹Westernblot，先在带膜的微孔板中培养细胞，然后在膜上细胞分泌的抗原形成斑点。此外，还需要根据自身

3、需要选择96孔板或是384孔板进行ELISA实验。通常人们使用双抗夹心法进行ELISA实验，双抗夹心法中抗原被夹在捕获抗体和抗体之间，这种方法既灵敏又有效，受到了许多研究者的青睐。不过有时候双抗夹心法并不是通用的选择，例如有时候抗原特别小让两个大抗体难以附着，又或者抗体只有一个抗体结合位点。在上述情况下，竞争性ELISA就更为适用，这种方法是采用带标记的纯化抗原与样本中无标记的抗原进行竞争，以结合捕获抗体。3. 方式如今ELISA有许多途径，我们可以根据自己的偏好进行选择。一般ELISA的是酶促反应的可溶性产物，抗体上结合有相应的酶（例如通常使用的辣根过氧化物

4、酶HRP），而反应体系中添加有相应的底物（如3，3-二氨基联苯胺DAB）。这种酶促反应生成具有特征性的颜色，可以通过分光光度计进行，碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。酶可以结合在一抗上，也可以结合在二抗上，还可以使用链霉亲和素标记的酶与亲和素标记的一抗结合。此外ELISA的结果还包括放射性、荧光、化学发光或显色法等。4. 交叉反应如果抗体间发生冲突或交叉反应就会影响整个实验的特异性。其中抗体来源所带来的兼容性就是交叉反应的一个因素。尽管现在购买源自指定动物的抗体越来越容易，我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。在用双抗夹心法进行ELISA时，用的二抗必须特

5、异性针对一抗，而不能与捕获抗体起反应。如果用二抗与捕获抗体结合，实验特异性就会大打折扣。通常我们选用源自不同宿主的捕获抗体和一抗，来避免上述问题。与此同时，了解试剂盒中提供的buffer也是有必要的（例如washingbuffer和blockingbuffer），以免这些buffer含有可能影响抗原抗体相互作用的组分，使结果收到影响。牛PAF,ELISA试剂盒双抗夹心elisa实验的原理试剂盒操作：牛PAF,ELISA试剂盒双抗夹心elisa实验的原理.常见elisa试剂盒1、细胞因子试剂盒：如白介素、选择素、集落刺激因子，肿瘤坏死因子，干扰素，转化生长因子，

6、趋化因子，细胞因子受体，粘附分子，生长因子，凋亡因子等等2、肝纤维化elisa试剂盒：如纤维连接蛋白，透明质酸，胶原，基质金属蛋白酶抑制因子，基质金属蛋白酶，层粘蛋白等等3、心肌梗塞elisa试剂盒：如肌钙蛋白，肌红蛋白，C-反应蛋白等等4、内分泌elisa试剂盒如甲状腺,胰腺,性激素,孕酮,睾酮,生长激素,生长抑素,内皮素,皮质醇,骨钙素,催乳素,促肾上腺皮质激素,促卵泡素,雌二醇，雌三醇，5-羟色胺，17-羟孕酮等等E.LISA试剂盒是当前使用广泛的一种方法。.具有直接，间接，夹心，竞争等ELISA方法。.是敏感性高，高效性，特异性强，重复性好，稳定性的诊

7、断方法。.产品吸附性好，空白值低，孔底透明高。.用于(血清、血浆和细胞培养上清液，细胞溶解产物，组织匀浆，尿液和脑脊液)。5，适用于人，大小鼠，猴，牛，猪，马，羊，鸡，狗等多种种属。6，节约材料与耗材，缩短时间，节省经费