elisa实验报告夹心法

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1、elisa实验报告夹心法ELISA双抗体夹心法ELISA双抗体夹心法摘要：ELISA双抗体夹心法(enzymelinkedimmunosorbentassay——sandelinkedimmunosorbentassay——sandol/LCB稀释液pH7.40.02mol/LTris-HCl缓冲液底物液0.1mol/LNa2HPO4(Na2HPO4·12H2O35.8g/L)5.14ml，0.05mol/L枸橼酸(10.5g/L)4.86ml混匀，加入邻苯二胺(OPD)4mg，置棕色小瓶中，临用时加30%H2O24.0μl，混匀。终

2、止液2mol/LH2SO4温箱、酶标反应板、酶标分光光度计【方法】1.包被取包被液适当稀释的抗HBS-Ig0.1ml，加到聚苯乙烯反应板各孔中。加盖，4℃24h。次日用洗涤液充分洗涤3次，甩干。2.各孔内加不同稀释倍数的待检血清0.1ml，同时加阳性和阴性对照血清，置43℃温箱60min，移去液体。同前法洗涤3次，甩干。3.各孔内加稀释HRP-抗HBs-IgG0.1ml，置43℃温箱60min。移去液体，同前法洗3次，甩干。4.各孔加底物液0.1ml，置黑暗处20min。5.各孔内加2mol/LH2SO40.05ml，终止反应。【结果

3、】1.目测法阳性孔呈桔黄色，阴性孔无色或极浅黄色。2.比色法用酶标分光光度计测A492nm，计算P/N值(为待测血清A492nm和阴性对照A492nm的比值)。如P/N2.1，结果为阳性，否则为阴性。ELISA简便、敏感、特异。并酶标记抗体试剂制备容易、稳定、有效期长、因此推广很快，ELISA双抗体夹心法，但仅适用于二价或二价以上的大分子抗原的检测。篇二：ELISA操作步骤(双抗体夹心法)ELISA操作步骤（双抗体夹心法）1.包被过程(注意设置空白对照,阴性对照):将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度，每孔抗原加入100μl,置37℃

4、,4h,或4℃,24h;弃去孔中液体，(为避免蒸发,板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)。2PBS洗3次，每次3分钟。具体为.吸干或甩干孔内反应液；.用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去）；浸泡，即将洗涤液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；吸干孔内液体，可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；.重复操作涤3次。3.加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):检测时一般采用1:50-1:400的稀释度,应采用较大稀释体积进行,一般保证样品吸取量>20μl。将稀释好的样品加入酶标反应孔中，每样品至

5、少加双孔，每孔100μl，置于37℃,40-60min。4PBS洗3次，每次3分钟。5.加入酶标抗体:酶标抗体:根据酶结合物提供商提供的参考稀释度进行或建立浓度梯度，37℃,30-60min之间，短于30min往往结果不稳定，每孔加100μl。6PBS洗3次，每次3分钟。7.加入底物液(现用现配):TMB(四甲基联苯胺)使用液:TMB(10mg／5ml无水乙醇)0.5ml底物缓冲液(PH5.5)10ml0.75％H2O232μl，底物加入量每孔100μl（TMB空白显色孔除外）,置37℃避光放置20-25分钟。8.终止反应:每孔加入终

6、止液50μl(2MH2SO4)终止反应,此时蓝色立转黄色，于20min内测定实验结果。9结果判断:可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。也可测吸光值：在ELISA检测仪上，TMB反应产物检测需要450nm波长，检测时一定要首先进行空白孔系统调零。用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示，当P/N大于2时作为抗体的效价即大于阴性对照吸光值的2倍，(数值的大小依具体检测要求而定)。篇三：实验三双抗夹心ELISA法检测IL实验三双抗夹心ELISA法检测IL-1白细

7、胞介素-1（IL-1）是一种单核因子，主要由单核细胞-巨噬细胞、上皮细胞以及树突状细胞分泌。它可以促进多种细胞增殖和活化，对免疫应答有重要的调节作用，也被称为淋巴细胞激活因子或内源性热原质等。本实验采用双抗加薪ELISA法检测人血清中的IL-1浓度，将标准品、待测样本加入到预先包被人IL-1单克隆抗体的酶标板中，洗涤除去未结合的成分，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人IL-1抗体，它将与人IL-1结合而形成免疫复合物，最后加入底物（OPD）显色，其颜色深浅（450nm波长下测定OD值）与样品中人IL-1浓度呈正相关。【试剂与器材

8、】预包被的酶标板，HRP标记的抗人IL-1抗体、重组IL-1标准品、待检样品、样品稀释液；洗涤液、显色液（含底物及酶反应体系）、终止液；37度恒温水浴锅、酶标仪、微量加样器、一次性吸头、吸水纸等。【方法】1、吸取包被抗体