生物化学实验2教案.doc

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1、酵母核糖核酸的分离及组分鉴定[时间安排]：3学时[目的类型]：验证[目的要求]：1、了解核酸的组分2、掌握鉴定核酸组分的方法[实验原理]：酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。[仪器]：研钵锥形瓶量筒滴管试管及试管架烧杯玻璃棒表面皿电子天平离心机恒温水浴锅[重要实验步骤与教学设计]：1.将2.5g酵母悬浮于5ml0.0

2、4mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀,至少15分钟。将悬浮液转移至150ml锥形瓶中，再用15ml0.04mol/L氢氧化钠溶液两次洗涤乳钵。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心（3000r/min）15分钟，将上清液缓缓倾入15ml酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待RNA沉淀完全后，离心（3000r/min）3分钟。弃去清液，转移到表面皿中，沉淀在沸水浴上干燥，即为酵母RNA的粗制品。2.将沉淀转移至小烧杯中，加入3当量/升硫酸6ml，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴

3、定。嘌呤碱：取水解液1ml加入约1ml0.1mol/L硝酸银溶液，然后加入过量浓氨水，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。核糖：取一支试管加入水解液1ml、三氯化铁浓盐酸溶液1ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。磷酸：取一支试管，加水解液1ml和定磷试剂1ml。在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。[实验注意事项]：苔黑酚显色的特异性较差，凡戊糖都有此反应。准微量DNA无影响，较多DNA存在有干扰，在试剂中加入适量的CuCl2可减少DNA的干

4、扰。小麦萌发前后淀粉酶活力的比较[时间安排]：3学时[目的类型]：综合[目的要求]：1、学习分光光度计的原理和使用方法。2.学习测定淀粉酶活力的方法。3.了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。[实验原理]：种子中贮藏的糖类主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。麦芽糖有还原性，能使3，5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基5-硝基水杨酸。后者可用分光光度计法测定。休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌发后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加。本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。[仪器]：

5、25ML刻度试管吸管研钵离心管分光光度计离心机[重要实验步骤与教学设计]：1.种子发芽小麦种子浸泡2.5小时后，放入25℃恒温箱内发芽。2.酶液提取取发芽第三天的幼苗5株，放入予冷的乳钵内，加海砂少许，加1%氯化钠溶液10mL,用力磨碎。在室温下放置20分钟，搅拌几次。然后将提取液离心6分钟，3000r/min。将上清液倒入量筒，测定酶提取液的总体积。取1ml酶液，用缓冲液稀释10倍。取干燥种子5粒作为对照，（提取步骤同上）。3.酶活力测定（1）取试管4支，编号。按下表要求加入各试剂（各试剂须在25℃预热

6、10分钟）。将各管混匀，放在25℃水浴中，保温3分钟后，立即向各管中加入1%3，5-二硝基水杨酸溶液2mL。（2）取出各试管，放入沸水浴中加热5分钟。冷至室温，加3.5mL蒸馏水稀释一倍，混匀。（3）用空白管作对照：在A500nm处测定各管的光吸收值，将读数填入下表。4.计算本实验规定：25℃时3分钟内水解淀粉释放1mg麦芽糖所需的酶量为1个酶活力单位。根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，A标准=c标准总活力单位=c酶×n酶×V酶[实验注意事项]：酶液提取时，要使用-20℃预冷的乳钵酶的特性[时间安排]

7、：3学时[目的类型]：综合[目的要求]：加深对酶的性质的认识内容：本实验由温度对酶的活力的影响；pH对酶活力的影响；酶的激活剂及抑制剂三组实验组成。(一)温度对酶活力的影响[实验原理]：酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为37～40℃，植物酶的最适温度为50～60℃。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显改变，但在I100℃的溶液中却很快地完全失去活性。低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。[仪器]：试管及试管

8、架恒温水浴冰浴沸水浴[重要实验步骤与教学设计]：取3支试管，编号后按下表加入试剂：摇匀后，将1号、3号两试管放人37℃恒温水浴中，2号试管放人冰水中。10分钟后取出，(将2号管内液体分为两半)用碘化钾—碘溶液来检验1、2、3管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果，将二号管剩下的一半镕液放人37℃水浴中继续保温10分钟后，再用碘液实验，结果如何？(二)pH对酶活性的影响[实验原理]：酶的活力受环境pH的影响极为显著；不同