生物化学实验教案.doc

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1、生物化学实验―教案―侯沁文目录实验一糖的颜色反应1实验二糖的还原作用3实验三多糖的实验4实验四糖的旋光性和变旋现象5实验五血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）7实验六人血清中总胆固醇的测定8实验七牛奶中粗脂肪含量的测定9实验八牛奶中酪蛋白的提取11实验九牛奶中酪蛋白含量的测定12实验十氨基酸的纸层析14实验十一醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质16实验十二蛋白质的颜色反应18实验十三蛋白质的沉淀反应20实验十四SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量21实验十五双缩脲法测定蛋白质浓度22实验十六考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度24实

2、验十七紫外光吸收法测定蛋白质浓度25实验十八血清谷丙转氨酶的测定27实验十九过氧化物酶的作用28实验二十溶菌酶的提纯结晶29实验二十一酵母RNA的提取30实验二十二RNA的定量测定（苔黑酚法）31实验二十三DNA的提取及含量测定32实验二十四荞麦中总黄酮的定性定量研究32实验一糖的颜色反应[实验目的及要求]1.掌握莫式（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。2.掌握塞式（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法。3.掌握杜式(Tollen)试验鉴定酮糖的原理和方法。[实验原理]1．莫式试验：糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水

3、产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与а-萘酚生成紫红色缩合物。2．塞式试验：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液。3．杜式试验：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后者与间苯三酚结合成樱桃红色物质。[实验仪器及用品]仪器：水浴锅。器皿：吸管、试管。实验药品：蔗糖、葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、半乳糖、а-萘酚、浓硫酸、95%乙醇、间苯二酚、盐酸、间苯三酚。[实验试剂]莫式试剂：а-萘酚5g,溶于95%乙醇并稀释至100ml。现用现配

4、，并贮于棕色试剂瓶中。塞式试剂：间苯二酚50mg，溶于100ml盐酸（VH2O：VHCl=2:1），现用现配。杜式试剂：2%间苯三酚乙醇溶液（2g间苯三酚溶于100ml95%乙醇中）3ml,缓缓加入浓盐酸15ml及蒸馏水9ml。临用时配制。[实验内容及步骤]一、莫式实验于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中），然后各加莫式试剂2滴，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml（切勿振摇！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。二

5、、塞式试验于4支试管中，分别加入0.5ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，然后各加塞式试剂2.5ml，摇匀，同时置沸水浴内，比较各管颜色及红色出现的先后顺序。三、杜式试验35于3支试管中加入杜式试剂1ml，再分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖溶液和1%阿拉伯糖溶液，混匀。将试管同时放入沸水浴中，观察颜色的变化，并记录颜色变化的时间。四、实验现象记录仔细观察实验中的颜色变化，对于塞式试验和杜式试验还需记录下颜色变化的时间。35实验二糖的还原作用[实验目的及要求]掌握糖的还原反应来鉴定糖的原理和方法。[实验原理]费林(

6、Fehling)试剂和本尼迪(Benedict)试剂均为含Cu2+的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，其本身则被还原成红色或黄色的Cu2O，此法常用作还原糖的定性或定量测定。[实验仪器及用品]实验仪器：水浴锅实验器皿：吸管、试管实验试剂：硫酸酮、氢氧化钠、酒石酸钾钠、柠檬酸钠、无水碳酸钠、淀粉、蔗糖、葡萄糖。[实验试剂]1.费林试剂试剂A：CuSO4·5H2O34.5g,溶于蒸馏水并稀释至500ml。试剂B：氢氧化钠125g，酒石酸钾钠137g，溶于蒸馏水并稀释至500ml。临用时将试剂A与试剂B等体积混合。2.本尼迪试剂

7、：柠檬酸钠（Na3C6H3O7·11H2O）及50g无水碳酸钠，溶于400ml蒸馏水中。另溶解8.5g硫酸铜于50ml热水中。将硫酸铜溶液缓缓加入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤。此混合液可长期使用。[实验内容及步骤]于3支试管中加入费林试剂A和B各1ml，混匀，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1ml，置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却，观察各管的变化。另取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液和1%淀粉溶液1ml，然后每支试管加本尼迪试剂2ml，置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却，和上面结

8、果比较。35实验三多糖的实验[实验目的及要求]1．熟悉淀粉多糖的碘试验反应原理和方法。2．进一步了解淀粉的水解过程。[实验原理]淀粉广泛分布于植物界，谷、果实、种子、块茎中含量丰富，工业用的淀粉主要来源于玉米、山芋、马铃薯。本实验以马铃薯为原料，利