病毒中和试验测定法.doc

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1、病毒中和试验测定法1.固定病毒稀释血清法(α法)本法用于抗血清的中和价。试验需先滴定病毒毒价，试验时将其稀释成每一单位剂量含200个TCID50，再将待检血清倍比稀释加等量200个TCID50/ml的病毒液，混匀后37℃1h，每一稀释度接种24孔细胞培养板4孔，每孔0.2ml。5%C02培养箱培养一定时间后，记录出现CPE孔数，以不出现CPE数和接种数的比为中和比值。按Karber法计算中和价。其公式如下：LogTCID50=L+d（S-0.5）（TCID50用对数计算，L为病毒最低稀释度的对数。d为组

2、距，即稀释系数，在10倍系列稀释则为-1，S为各组CPE与接种数比值之和）50%中和试验举例血清稀释1/101/201/401/801/1601/320稀释度对数-1-1.3-1.6-1.9-2.2-2.5每一接种剂量含病毒100TCID50或100LD50或100EID50或100ID50中和比值4/44/44/44/42/40/4L=-1，d=-0.3，S=4/4+4/4+4/4+4/4+2/4=4.5代入Karber公式：LogND50=-1－0.3*(4.5-0.5)=2.2该抗血清ND50(半

3、数中和单位)为10-2.2，即1/160，则其中和价为160ND50/ml，可以简写成160。2.固定血清稀释病毒法(β法)本法用于测定抗血清的中和指数。将病毒原液10倍系列稀释，分列于2排无菌管，第一排加等量正常血清（对照组）；第二排加待检血清（中和组），混匀后，置37℃1h，分别接种细胞板孔（或鸡胚、实验动物）进行培养，记录CPE（鸡胚、动物死亡数），计算TCID50（或LD50），按下式计算中和指数。中和组TCID50（或LD50）中和指数=————————————对照组TCID50（或LD50）

4、查反对数，即得该待检血清的中和指数。通常中和指数>50者判为阳性，10-49为可疑，<10者为阴性。例如：对照组滴度的LD50=10-6.5中和组滴度的LD50=10-4.5中和指数=10(6.5-4.5)=102.0=100中和指数的对数Log=Log100=2.0一般来说，以10倍稀释进行滴度测定，Log10=1。因此小于10（11.7)则是有意义的.