饲料中粗蛋白测定.ppt

《饲料中粗蛋白测定.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在PPT专区-天天文库。

1、实验二饲料粗蛋白的测定饲料粗蛋白测定的意义：蛋饲料中含氮物质包括蛋白质和非蛋白质含氮化合物，两者总称为粗蛋白。蛋白质是畜禽日粮中最主要的物质之一，蛋白质是生命的物质基础。测定饲料中蛋白质的含量，对于初步评价饲料的营养价值、合理开发利用饲料蛋白资源、提高产品质量、优化饲料配方、指导经济核算及生产过程控制均具有极重要的意义。蛋白质测定方法：1．直接法根据蛋白质的物理、化学性质直接测定蛋白质含量双缩脲法Folin—酚试剂法（Lowry法）紫外吸收法（最常见的280nm）考马斯亮兰法（Bradford法）－染料结合法2．间接法通过测定样品中总含氮量推算蛋白质含量（根据：每种蛋白质的含氮量是

2、恒定的，N×6.25）。凯氏定氮法杜马斯燃烧定氮法强碱直接蒸馏法饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法凯氏定氮法是9世纪建立的经典方法，结果可靠但操作费时。在经典法基础上选择催化剂，加快分析速度，改进仪器装置。是目前饲料中粗蛋白分析最常用的方法。适应范围：本方法适用于配合饲料、浓缩饲料精料补充料和单一饲料。测定原理：饲料的有机物质在催化剂（如CuSO4，K2SO4或Na2SO4或Se粉）的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和氨态氮（在一定处理下也包括硝酸态氨）都转变成氨，并被浓硫酸吸收成为硫酸铵；而非含氮物质，则以CO2，H2O，SO2状态逸出。消化液在浓碱的作用下释放出氨，通过蒸馏，氨

3、随汽水顺着冷凝管流入硼酸吸收液中，并与其结合成硼酸铵，然后以甲基红—溴甲酚绿作混合指示剂，用盐酸标准溶液滴定，求出氨的含量，再乘以一定的换算系数，即得出试样中粗蛋白的含量。测定原理：①样品消化2NH2(CH)2COOH＋13H2SO4＝(NH4)2SO4＋6CO2＋12SO2＋16H2O②氮的蒸馏2NaOH＋(NH4)2SO4＝2NH3↓＋Na2SO4＋2H2ONH3+H3BO3=NH4H2BO3③滴定NH4H2BO3+HCl=NH4Cl+H3BO3浓硫酸的脱水性与强氧化性仪器设备：分析天平：感量0.0001g消煮炉或电炉酸式或通用滴定管：25mL，50mL消化管或者凯氏烧瓶：25

4、0mL开始蒸馏装置：常量直接蒸馏或半微量蒸馏式三角瓶：150mL，250mL容量瓶：100mL定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动和全自动蛋白质测定仪。试剂与溶液：浓硫酸：化学纯混合催化剂：0.4g硫酸铜（CuSO4·5H2O），6g无水硫酸钾或无水硫酸钠，磨碎混匀。400g/L氢氧化钠溶液：400g氢氧化钠（化学纯）溶于1000mL水中。20g/L硼酸溶液：20g硼酸（化学纯）溶于1000mL水中。盐酸标准滴定溶液：用基准物质碳酸钠，按附录八进行标定。c（HCl）=0.1mol/L：8.3mL浓盐酸，注入1000mL水中（用于常量定氮法）c（HCl）=0.02mol/L:1.67

5、mL浓盐酸，注入1000mL水中（用于半微量定氮法）混合指示剂：1g/L甲基红乙醇溶液与5g/L溴甲酚绿乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期为三个月。硫酸铵：分析纯、干燥蔗糖：分析纯硼酸吸收液（全自动定氮仪用）：10g/L硼酸溶液1000mL，加入1g/L溴甲酚绿乙醇溶液10mL，40g/L氢氧化钠溶液0.5mL混合，置阴凉处保存期为1个月。CuSO4的作用防止飞溅实验步骤：（1）试样的消化电炉消化：称取0.2~0.4g试样（含氮量5~80mg），准确至0.0002g,放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入浓硫酸10mL和2粒玻璃珠。将凯氏烧瓶放在通风柜

6、里的电炉上或凯氏消化架上小心加热。开始小火，待样品焦化，泡沫消失，再加大火力，并消化直至溶液呈透明的蓝绿色后，再加热消化15min。消化管消化：称取0.2~0.4g试样（含氮量5~80mg），准确至0.0002g,放入消化管中，加入6.4g混合催化剂与试样混合均匀，或加入2片商业消化片，再加入浓硫酸10mL，于420℃下消化炉上消化60~90min,取出后冷却，用少量蒸馏水冲洗消化管帽。建议消化炉消化程序一般设定为：200℃，30min；420℃，60~90min。消化时间不宜过长，会使测定结果偏低防止水中氨态氮的逸失而影响测定值。实验步骤：（2）氨的蒸馏①半微量蒸馏法半微量蒸馏法

7、使用凯氏定氮法定氮装置。将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中。冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。取20mL/g硼酸溶液35mL于锥形瓶中，加2~3滴混合指示剂，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。蒸汽发生器中的水应加入甲基红指示剂数滴、硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此溶液为橙红色，否则需补加浓硫酸。准确移取试样分解液10~20mL，注入蒸馏装置的反应室内，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加400g/L氢氧化钠溶液10mL，