饲料中粗蛋白的测定

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1、饲料中粗蛋白的测定MethodforthedeterminationofcrudeproteininfeedstuffsPage4of4文件编号Codeno:YHQA&QC-04-06.3发布日期IssueDate:2003-08-01版本号RevisionNo:2修订日期RevisionDate:2004-08-291　主题内容与适用范围　　本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。2　引用标准　　GB/T6432-943　原理　　凯氏法测定测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下

2、，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氨含量，将结果乘以换算系数6.26，计算出粗蛋白含量。4　试剂4.1　硫酸（GB625）：化学纯，含量为98％，无氮。4.2　混合催化剂：0.4g硫酸铜（CuSO4•5H2O），6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。4.3　氢氧化钠溶液（GB629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。4.4　盐酸（GB622）标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，0.1mol/L和0.02mol/L。4.5　蔗糖（HG3-1001）：分析纯

3、4.6　硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。4.7　混合指示剂　　甲基红（HG3-958）0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3-1220）0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存，保存期为3个月。4.8　硼酸（GB628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。5仪器5.1　分析天平：感量0.0001g5.2　实验室用样品粉碎机或研钵5.3　分样筛：孔径为0.45mm(40目)5.4　消化炉或电炉。5.5　滴定管：酸式，10、25ml5.6凯式烧瓶：250ml5.7凯式蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。5

4、.8锥形瓶：150ml、250ml。5.9容量瓶：100ml饲料中粗蛋白的测定MethodforthedeterminationofcrudeproteininfeedstuffsPage4of4文件编号Codeno:YHQA&QC-04-06.3发布日期IssueDate:2003-08-01版本号RevisionNo:2修订日期RevisionDate:2004-08-295.10消煮管：250ml5.11定氮仪：以凯氏原理制造的各类半自动、全自动蛋白质测定仪6试样的选取和制备选取有代表性的试样，用四分法将样品缩

5、至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密闭容器中，防止试样成分的变化。7步骤7.1仲裁法　7.1.1试样的消煮称取试样0.5g~1g（含氮量5~80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化剂（4.2），与试样混合均匀，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉（5.4）上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360~410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。7.1.2氨的蒸馏（蒸馏步骤的检验见附录A）7.1.2.1常量蒸馏法将试样消煮液

6、（7.1.1）冷却，加入60~100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸（4.8）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶内。然后小心向，凯氏烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3），轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1~2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。7.1.2.2半微量蒸馏法将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，

7、摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10~20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。注：7.1.2.1和7.1.2.2蒸馏法测定结果相近

8、，可任先一种。7.1.2.3蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵（4.6），代替试样，按7.1.2和7.2.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。7.1.3滴定用7.1.2.1和7.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L（4.6.1）或0.02mol/L（4.6.2）盐酸标准