微生物工程实验.ppt

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1、发酵工程实验室规则实验室内严禁饮食吸烟。进入实验室需穿实验服。实验前将桌面清理赶紧，非必要之用品放入抽屉中，必需用的书籍和文具等也应放置在非操作区，以免污染。坐在实验椅上操作实验，勿随意走动或奔跑。实验进行之前应确实了解其目的以及进行步骤，才能独立操作并于实验结束后分析结果。认真进行各项实验，严格掌握无菌技术。各个实验用品按指定地点存放。实验中发生差错或意外事故时，应立即报告老师及时处理。切勿隐瞒或自作主张不按规定处理，如万一发生有菌材料污染桌面、衣物等，应立即用抹布浸沾2～3%来苏（或5%石炭酸液），泡在污染部

2、位，经半小时后方可抹去。如手上沾有活菌也用上述消毒液浸泡10分钟左右，再以肥皂及自来水反复洗净。要爱护室内仪器设备，按使用规则操作，并应节约使用实验材料。如不慎损坏了器材等，应报告教师。做好实验记录，写好实验报告。关于实验材料：培养基、培养液接种前均应清楚标示日期、组别、菌名及姓名。实验结束后，使用过的仪器、设备、器皿一律物归原处，每组小组长负责清理工作。值日生由各组同学轮流担任，负责实验结束后的整理、清洗及打扫工作，另外离开实验室后要负责水、电、门、窗的安全。每次使用发酵罐及实验过程中换人时，必须填写好发酵罐使

3、用记录本。实验过程当中，一台发酵罐必须要有至少一人看守。考核方式（1）实验报告：要求报告内容包括：题目、目的、原理、操作步骤、实验结果及讨论。（2）考核方式：平时成绩（实验预习、考勤、纪律、实验仪器的组装和使用能力，实验的技能技巧，实验态度以及安全、卫生和药品的节约等）占40%；实验报告占60%。实验安排液态发酵——酵母菌的上罐发酵菌种的扩培发酵罐的结构和灭菌单因素实验的设计与取样单因素实验比较及生长曲线的测定固态发酵——葡萄酒的酿制及菌种的分离实验一.固体发酵——葡萄酒的酿制及菌种的分离实验目的了解酵母菌作用下

4、制成葡萄酒的过程。熟悉葡萄酒的制作方法。学习从发酵液中分离酵母菌。实验原理酵母菌在厌氧的状态下可把糖分解为酒精和二氧化碳。葡萄酒就是在酵母菌的作用下酿制而成。实验药品及器材葡萄；白砂糖；发酵器皿；保鲜膜等实验步骤清洗：用水整串淋洗，用洗净的手将葡萄尽量撕揉碎，连皮、籽一起装罐。。入罐：粉碎后的葡萄果液可装入清洁最好消毒后的干燥陶瓷、玻璃、无毒塑料容器进行前发酵。（容器要稍大，以保证装葡萄果液后有30%的空间，因为剧烈发酵时会产生气泡，会将葡萄皮往上翻涌，装得太满会溢出容器）加白糖量：每斤葡萄汁要加40-60克白糖

5、（糖加少了，影响发酵和酒精度；加多了，成本高。而且糖浓度太大，会使单细胞酵母的细胞壁渗透压过大，影响生长）。加糖一般分二次加入。第一次在装入葡萄后24小时，加入一半，3-4天后视发酵情况再加剩余的一半。前发酵：装瓶罐后，先在25-28度环境里放置24小时，不要加糖。前发酵时容器不能密封，酵母繁殖需要氧气，发酵过程中会产生的二氧化碳需要排除，还要将上浮的果皮按入果液中进行搅拌，又要分次加糖搅拌等一系列的操作，都需要开盖才行。经过一周左右发酵，把糖消耗完毕后自然停止发酵，果皮不再浮上来，即达到止发酵点。6-7天后应把

6、皮、籽过滤取出。后发酵：一般前发酵7天后，将果汁内的皮、籽用筛网或尼龙纱网布过滤取出，用滤纸再过滤一次，装入清洁容器密封进行后发酵20-30天。此时容器最好不留空隙，切断氧气，防止细菌侵入。也可在液面上加些食用酒精，酒精比重比葡萄酒小，浮在表面形成保护层隔断氧气。同时要避光，防止酒色氧化变浅，所以，容器不能用透明的瓶。后发酵时用软木塞密封装瓶30天后启封，可以发现酒液变澄清，底部有一层沉淀，这是酵母完成历史使命后的“尸体”及杂质。上层的清纯酒液同样用虹吸或过滤的方法再提纯一次。用不透光的酒瓶灌装，然后密封，存放温

7、度最好在12度，酒瓶横躺或略微瓶口向下倾斜存放，可保存二年左右。酒精度的测定：对第7天，第30天的葡萄酒液测酒精度用4层纱布过滤发酵液.量取过滤液100ml于蒸馏瓶中，另加入50ml蒸馏水，加入数粒玻璃珠防止暴沸，装上冷凝管，加热蒸馏，直至馏出液体积约为95ml时，停止蒸馏。用蒸馏水定容至100ml，用酒精计测量，按测得的实际温度和酒精计示值查附表2，换算成20℃时的酒精度。实验结果及讨论从色、香、味以及所测得的酒精度等方面对所酿制的葡萄酒进行评价从葡萄酒中分离野生型酵母菌取成熟前15天的紫皮中等颗粒的葡萄750

8、克，挑出烂葡萄；摘除蒂，用洗净的手充分捏碎葡萄；装入清洁的非金属容器加盖，在20-25度环境中放置24小时；加入30-40克白糖，用木筷拌匀，并把葡萄皮按入果液中；发酵3-4天后再加入30-40克白糖拌匀，并把浮起的葡萄皮按入果液中；7天后发酵停止，用非金属筛网布和滤纸、细布过滤去掉葡萄皮及籽；静止12小时，用乳胶管虹吸出清纯酒液（或用滤纸、细布过滤）后装瓶密封；30天后