《微生物实验》PPT课件

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1、医学微生物学实验综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）空气、手指皮肤细菌学检查结果分析菌落特征观察P11细菌纯培养P10（纯培养不得超过18小时）脓汁和粪便标本检验（录像）肠道致病菌的分离与鉴定（录像）油镜使用方法（讲解）空气的细菌学检查组号时间地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU/m3＝50,000N÷AT≈86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟)CFU：colonyformingunit医院各类房间空气中细菌总数要求细菌数分级细菌总数/M3病房类

2、型最低细菌数＜10器官移植、心血管手术室、制剂室。低细菌数＜200无菌室或其他手术室、婴儿室、产房、术后恢复室、供应室。一般细菌数200～500普通病房、治疗室、放射科、按摩室。★注1：以上为世界卫生组织建议标准。★注2：我国卫生部要求，手术室、产房及婴儿室空气中细菌总数不得超过500个/M3。液体或固体标本菌落总数测定可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。分别取1ml注入直径9cm的灭菌平皿内。倾注46℃营养琼脂培养基大约15ml，混合均匀。琼脂完全凝固以后，37℃培养48小时。选择菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出c

3、fu/g(ml)。13241324手指皮肤的细菌学检查第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。2人1块平板甲、丙→常规洗手乙、丁→标准洗手甲（丙）乙（丁）丙丁手指皮肤细菌学检查结果分析第1格为洗手前：+第2格为洗手后常规(甲、丙)洗手方法：?标准(乙、丁)洗手方法：?第3格为消毒后：±第4格空白对照：-细菌在固体培养基中的生长现象菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性.菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多个菌落融合在一起形成

4、的细菌堆积物。菌落特征P11大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约1～3mm)，小(直径约1mm以下)。形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。细菌的纯培养挑选单菌落:脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆

5、形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径2～3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径1～2mm。选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落，进行接种。斜面接种法P10（1组4支）甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面乙→普通平板→白色菌落→1支斜面丙→伊红美蓝→紫黑菌落→1支斜面丁→伊红美蓝→粉红菌落→1支斜面★标记：组号、黄色

6、、白色、紫黑、粉红。★培养时间不得超过18小时。斜面接种法P10甲→黄色,乙→白色,丙→紫黑,丁→粉红。标记：组号，颜色安全警告接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。奥林巴斯CX21型生物显微镜（实验柜内，每人一台）注意：只能横放，不得竖放。奥林巴斯CX21型生物显微镜使

7、用须知显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作。在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。★如果拿住载物台①和镜筒②等部位搬运的话，有可能会造成损坏。显微镜各部件名称开关与调整光强开或关之前，必须将亮度调整旋钮②按箭头相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。电源开关①拨到∣侧为开，拨到○侧为关闭。按箭头方向转动亮度调整旋钮②变亮，相反方向转动则变暗。放置标本按箭头方向转动粗调旋钮②降下载物台。按箭头方向拉开载物台标本夹③，自前向后将标本片放入平台，标本夹③轻轻放回原位。转动上侧垂直移动杆④和下侧