《微生物实验常识》PPT课件

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1、表1我国各主要土壤的含菌量(万/克干土)土类地点细菌放线菌真菌暗棕壤黑龙江呼玛2,32761213棕壤辽宁沈阳1,2843936黄棕壤江苏南京1,4062716红壤浙江杭州1,1031234砖红壤广东徐闻5073911磷质石灰土西沙群岛2,2291,10515黑土黑龙江哈尔滨2,1111,02419黑钙土黑龙江安达1,0743192棕钙土宁夏宁武140114草甸土黑龙江亚沟7,8632923嵝土陕西武功9511,0324白浆土吉林皎河1,598553滨海盐土江苏连云港466410.41、取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。先除去表层约2cm的土壤，

2、将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。盛土的容器应是无菌的。将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。土样取回后应尽快投入实验，同时取10-15g，称重后经105oC烘干8h，置于干燥器中冷却后再次称重，计算含水量。四、土壤微生物的分离和计数2、倒平板熔化已灭菌的上述4种培养基并冷却至45oC左右倒平板，凝固待用，每种培养基每个稀释度各三只平板。8.计数选菌落分散、菌落数适量且各平行皿菌落数接近的稀释度的平皿计数，通常细菌和放线菌选取菌落数在30～300之间的平皿，霉菌选菌落数在10～100之间的平皿，最后换算成每克干土所含菌数。同一稀释

3、度的平均菌落数×稀释倍数每克干土含菌数=1－土壤含水量％一、水样采集自来水水样：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min（经常用水的水龙头放水1～3min）后，采集水样于无菌锥形瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水样。水源水水样：选有代表性的地点及可疑地方，一般距水面下10～15cm采样。采样后，将瓶塞盖好，再从水中取出。注意事项严格无菌操作。做好标记：采得水样后应立即记录水样名称、地点、时间等项目。从速送检。水样从采集到检验不应超过2h，在0～4℃下保存不应超过24h。二、菌落总数的测定—平板菌落计数法[方法]稀释水样：无菌吸10ml

4、混匀水样注入90ml灭菌水瓶中,混匀成1:10水样。取1:10水样1ml注入9ml灭菌试管中混匀成1:100水样。同法稀释成1:1000,1:10000水样。[方法]倾注培养：用1ml无菌吸管吸取2~3个适当浓度的稀释液1ml,分别注入无菌平皿中，每个稀释度应同时做2个平皿，另取一平皿作空白对照。再做倾注培养(方法同饮用水)。菌落计数：方法同饮用水。菌落总数测定[结果分析与报告]计算不同稀释度的平均菌落数：稀释度的选择和菌落总数报告方式：首先选择平均菌落在30～300之间者进行计算。计算方法和报告方式如表1所示。由表2可判定水质被污染的程度。表2一般水源水

5、中菌落总数与水清洁程度的关系水的类别最清洁水清洁水不太清洁水不清洁水极不清洁水菌落总数cfu／m110~100100~10001000~1000010000~100000＞1000001.9灭菌与消毒消毒：是指应用物理或化学方法杀死物体表面和内部的病原微生物，而对非病原微生物及其芽孢并不严格要求全部杀死。用于消毒的化学物质，称为消毒剂。灭菌：是指杀死一切病原菌和非病原菌及其芽孢，使物体上无任何存活的微生物消毒与灭菌的区别消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体.灭菌是指杀灭一切微生物的营养体,芽孢和孢子.干热灭菌法灼烧灭菌法：利用火焰直接把微生物烧死。此

6、法彻底可靠，灭菌迅速，但易焚毁物品，所以使用范围有限，只适合于接种针、环、试管口及不能用的污染物品灭菌。干热空气灭菌法：这是实验室中常用的一种方法，即把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温至160℃，恒温1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用具等的灭菌。湿热灭菌法:在同样的温度下，湿热灭菌的效果比干热灭菌好，这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性。另一方面高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡。图4－12细菌菌落形态。（a）肉眼观察的细菌菌落形态的多变性。菌落总体形状和边缘状况可由菌落上方俯视观察。而菌落高度则由平板边缘水平观察。

7、1、简单染色(四）实验方法：制片→染色→水洗→干燥→镜检（1）制片：取菌种培养物常规涂片、自然干燥、加热固定；注意无菌操作芽孢有的长在中央或近中央，圆形或椭圆形，芽孢的大小，位置，在分类鉴定上有一定的意义，它仅仅是芽孢细菌生活史的一个环节，它还是检验培养基灭菌彻底不彻底的依据。中央芽孢偏端芽孢游离芽孢末端芽孢荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可以溶于水，易在用水冲洗时被除去。荚膜虽不是细胞的主要结构，但它是细胞外碳源和能源性贮藏物质，并能保护细胞免受干燥的影响，同时能增加某些病

8、原菌的致病能力，使之抵御宿主吞噬细胞的吞噬。荚膜染色结果背景灰色，