环境工程微生物学实验.ppt

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1、环境工程微生物学实验安徽建筑大学环境与能源工程学院鲍立宁进德弘毅博学善建实验一显微镜的使用及微生物形态的观察实验目的1．学习普通光学显微镜的使用方法（本实验学习低倍镜和高倍镜的使用）。2．观察霉菌、酵母菌、放线菌、藻类的形态和构造。实验原理由于细菌的细胞小，菌体透明，肉眼无法看到的微小生命体。我们可以借助显微镜来进行观察。显微镜的种类很多，但基本构造可分为两大部分：一是机械装置，二是光学系统。通过物镜和目镜的放大作用，可以使人类看到无法用肉眼观察到的微小生物。显微镜的使用1．观察前的准备(1)置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约3-4cm,镜检者姿势要端正，左眼观察，右眼便于绘图或记

2、录。(2)调节光源、光线较强的天然光源宜用平面镜；光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜。2．低倍镜观察（1）低倍镜旋到镜筒下方，旋转粗调节器,镜头与载物台相距0.5cm。（2）打开聚光器，使之与载物台同样高度。（3）左眼看目镜，观察光源强弱，使全视野内均匀明亮。可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器，旋转反光镜调节光线。3．高倍镜观察（1）将高倍镜转至正下方，在转换物镜时，需用眼睛在侧面观察，避免镜头与玻片相撞。（2）如果低倍镜重调对，换高倍镜时基本可以看到目的物，若有点模糊，用细调节器调就清晰可见。（3）找到最适宜观察的部位后，将此部位移至视野中心，准备用油镜观察。观察所制备的微生物标本玻片，

3、画出所见原生动物、细菌、真菌等微生物的形态草图。观察结果实验二活性污泥中原生及微型后生动物观察和数量的测定实验目的观察活性污泥法曝气池混合液中原生及微型后生动物的状态，辨别其种类，并测定每种微型动物的数目。实验原理测定微生物数量方法很多，通常采用的有显微镜直接计数法、平板计数法和光电比浊计数法。在本实验中采用显微镜直接计数法。实验器材显微镜、计数板、活性污泥、盖玻片、吸管、吸水纸。计数方法1．将活性污泥法曝气池混合液轻轻搅拌均匀；2．取洗净的滴管一支，吸取摇匀的混合液或己稀释的混合液加一滴到计数板的中央方格内，然后加上一块洁净的大号盖玻片，使玻片的四周正好搁在计数板四周凸起的边框上。3．用低

4、倍显微镜进行计数，同时记录各种动物的活动能力、形态结构等。原生动物中有不少种类是群体，须将群体和群体上的个体分别计数。4．计算：设在一滴水中测得钟虫30只，则每ml混合液中含有钟虫30×2×20＝1200只，如测得轮虫10只，则每毫升混合液含轮虫10×2×20＝400只结果记录动物名称每滴稀释液中的虫数每ml混合液中的虫数状态描述实验目的1.熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。2.掌握培养基和无菌水的制备方法。3.掌握高压蒸汽灭菌技术。实验三培养基的配制和灭菌实验原理培养基是用人工的办法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要配制成的一种营养基质。培养基中均应含有满足微生物生长发育且比例合适的水分

5、、碳源、氮源、无机盐、生长因素以及某些特需的微量元素外还应具有适宜的酸碱度〔pH值〕、缓冲能力、氧化还原电位和渗透压。实验器材(1)药品和试剂：牛肉膏、蛋白陈、NaCl、10％NaOH溶液、l0％盐酸溶液、琼脂、水等。(2)器材：小烧杯、小铝锅、天平、牛角匙、1000mL刻度烧杯、玻棒、pH试纸、试管、分装漏斗、棉花。高压蒸气灭菌锅、烘箱。实验步骤一、玻璃器皿的洗涤和包装清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。棉塞的制作包装培养皿和移液管等。3-1棉塞制作方法3-2移液管灭菌前的包装二、培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基的配制：（一）培养基配方：牛肉膏2.5g蛋白胨5.0g、NaCl2.5

6、g、琼脂10.0g、自来水500mL、pH7.2-7.4。（二）操作步骤：1.取一个1000mL烧杯，装500mL蒸馏水。2.按配方逐一正确称取各种成分，依次加入水中溶解。注意：a.前一种成分溶解之后，才能加入下一种成分b.蛋白胨、肉膏可加热促进溶解c.加热过程应不断搅拌，以免糊底烧焦，并适当补充因蒸发而损失的水量。3.调pH值：用10％NaOH调pH至7.2~7.4，用精密pH试纸对照。4.分装：将培养基分装于5支试管，其余全部倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。5.包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。6.灭菌备用：灭菌条件：121℃（相当蒸汽压力0.103MPa）培养基灭菌后必须在37

7、℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。图例图2－3培养基分装图2－4斜面制作三、稀释水的制备1.取一个250mL的锥形瓶装90(或99)mL蒸馏水，塞棉塞、包扎，待灭菌。2.另取5支18mm×180mm的试管，分别装9mL蒸馏水，塞棉塞、包扎，待灭菌。无菌稀释水为微生物分离实验中所需要的材料。四、灭菌加热灭菌有干热灭菌和湿热灭菌。干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器。干热灭菌的操作方法：a.将待灭菌的物品