微生物基础实验.ppt

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1、微生物血球计数板直接计数法与微生物个体大小测定微生物血球计数板直接计数法一、目的要求二、基本原因：此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含菌数，包括死活细胞、微小杂物也被计算在内。这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形态个体较大的菌体或孢子。计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格区，中央的一大格作为计数用，称为计数室。计数室刻度有2种：一种是25中格X16小格，而另一种为16中格X25小格，它

2、们都是由400个小格组成。每个大格边长为1mm，则每个大方格面积为1mm2。载玻片与盖玻片之间高度为0.1mm,所以每个计数室的体积为0.1X1mm2=0.1mm3,每个大格有400个小格，每个小方格体积为0.1mm3/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。血球计数板的分区与分格例一例二1大格=16中格1大格=25中格=16X25小格=25X16小格=400小格=400小格****#####三、材料与仪器：1、待测样品：灵芝孢子悬液2、显微镜，血球计数板，滴管、盖玻片等。四、方法与步骤:1、取洁净的血球计数板，在计数室上

3、面盖上盖玻片。2、取稀释灵芝孢子液，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到方格网后，再转换高倍镜观察并计数。3、如用16X25计数板，只计四个角上中方格的菌数。若是25X16的计数板，除计数四个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的菌数,即总共5个中方格。每个样品重复计数2~3次。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。5、计数方法：样品中菌数/ml=每小格平均菌数x4000,000x稀释倍数，本实验采用25x16规格，要求数五个方格中的

4、全部小格总数为80个。设：每个中方格的菌数为A，则每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80A1+A2+A3+A4+A5菌数/ml=X4000,000X稀释倍数80结果记录：微生物名称总菌数个/ml第一个中格第二个中格第三个中格第四个中格第五个中格第一次测定第二次测定平均每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80A1+A2+A3+A4+A5菌数/ml=X4000,000X稀释倍数80四、测定注意事项:1、测定时，灵芝孢子菌液要摇匀，防止孢子凝聚沉淀。2、位于格线上的孢子一般只计此格的上方线及左方线上的孢子。微生物

5、个体大小测定一、目的要求：学习测微技术：测量微生物的大小。二、基本原理：微生物细胞大小，是其形态特征重要标志之一。每一种微生物在一定条件下，有其相对固有的大小形态。它是分类鉴定的依据之一。其大小测定可用测微尺测量。测微尺分为目镜测微尺和物镜测微尺两部分。1、目镜测微尺：目镜测微尺是一块可以放入接目镜内的特定圆形玻璃片。玻片中央是一个细长带刻度的尺，等分成50或100小格，测量时将其放在目镜隔板上。有的目镜测微尺呈方格网状，但用法一样。目镜测微尺不随显微镜放大倍数变化而变化,故目镜测微尺每格实际代表长度随显微镜的放大而不同。因此在使用前必

6、须用物镜测微尺校正，以求得在一定物镜及目镜等光学系统下，目镜测微尺每格所代表的实际长度2、物镜测微尺:物镜测微尺（镜台测微尺）是一块中央部分刻有精确等分线的载玻片。把1mm等分为100格，即每一刻度间距为10um，是专门为校正目镜测微尺实际数值用的。三、材料与仪器1、灵芝孢子2、显微镜、物镜测微尺、目镜测微尺四、方法与步骤1、目镜测微尺的校正1）将目镜测微尺装入目镜内，刻度朝下，并将物镜测微尺朝上置载物台上。2）先用低倍镜核对，至能清晰看到物镜测微尺。3）改用高倍镜(40*)对焦后，转动目镜，使目镜测微的刻度和物镜测微尺刻度平行。4)两

7、尺吻合后，先使两尺的一端某一刻度完全重合，然后再寻找另一端第二条重叠的刻度。5)计下两吻合刻度间，目镜测微尺与物镜测微尺的格数。按下列公式算出目镜测微尺每小格所代表长度。目镜测微尺每格长度（微米）两吻合刻度间物镜测微尺格数×10μm=两吻和刻度间目镜测微尺格数例如：目镜测微尺的5格等于物镜测微尺的2格，则目镜测微尺1格=（2×10）/5=4微米目镜测微尺安装方法目镜测微尺目镜测微尺一镜台测微尺及其中央部分的放大镜台测微尺校准目镜测微尺时的情况2、微生物大小测定：1）在载玻片上滴上灵芝孢子液,盖上盖玻片，即制成。2)将“水浸片”标本置于载

8、物台上，先用低倍镜观察到目标后，转换高倍镜(40*)测量灵芝孢子的大小，要测长度与宽度，测量10—20个菌体，求出其平均值。(3)测量结果记录：在高倍镜（40*）下：目镜测微尺——格=物镜测微尺——格目镜测