微生物实验基础

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1、实验一.二培养基的配置.灭菌物品的准备及灭菌一.实验原理(一)培养基营养要素:碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水培养基：人丄配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合养料。要求：应具备6大营养要素;物质比例合适;必须灭菌。按成分的不同分天然培养基、合成培养基、半合成培养基按培养丛的物理状态分网体培养基、液体培养基、半固体培养基按培养基用途基础培养基、选择培养基加富培养基、鉴别培养基按成分的不同分天然培养基、合成培养基、半合成培养基按培养基的物理状态分固体培养基.液体培养基、半固体培养基按培养基用途基础培养基、选择培养基加富培养基、鉴別培养基固体培养基是在液体培养基屮添加凝固剂制

2、成的，常用的凝固剂冇琼脂、明胶和硅酸钠，其屮以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，-般微个物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。琼脂奋95°C的热水小才开始融化，融化厉的琼脂冷却到45°C才巫新凝

3、A1o因此川琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范用内(25°C-37°C)不会融化而保持固体状态。灭菌是用物理或化学的方法來杀死或除去物品上或环境中的所冇微生物。消毒是用物理或化学的方法杀死物体上绝人部分微生物（主要是病原微牛•物和有害微定物）。消毒实际上是部分灭菌。在微生物实验、生产和科研工作中，需要进行纯培养不能有任何杂菌，因此，对所用器材、培养基要进行严

4、格灭菌，对工作场所进行消進，以保证工作顺利进行。（二）、消毒与灭菌的方法消毒与灭菌的方法很多，i般可分为加热、过滤、照射和使用化学约品等方法。㈠、加热法加热法乂分干热火菌和湿热灭菌两类。1、干热灭菌冇火焰烧灼灭菌和热空气灭菌两种。火焰烧灼火菌适用于接种环、接种针和金属用具如锡子等，无菌操作时的试管口和瓶口也在火焰上作短何烧灼灭菌。通常所说的干热灭菌是在电烘箱内灭菌，此法适用于玻璃器II1L如吸管和培养皿等的灭菌，在热空气160°C-170°C下保温2小时进行灭菌。2、湿热灭菌⑴高压蒸汽灭菌法此法是将物品放在高压蒸汽灭菌锅内1.05kg/cm2（15磅/英寸2）,121.3°C保持15

5、-30分钟进行灭菌。时间的氏短可根据火菌物品种类和数量的不同而冇所变化、以达到彻底火菌为准。这种火菌适川丁•培养基、工作服、橡皮物品等的火菌。⑵间歇火菌法冇少数培养基例如明胶培养基、牛乳培养基、含糖培养基等用十热火菌和高压蒸汽灭菌均会受到破坏，则必须用间歇灭菌法。此法是用阿诺氏流动蒸汽灭菌器进行灭菌。该器底层盛水，顶部插有温度计，加热后水蒸汽温度达到100°C时，即循环流于器内，水蒸汽碰到器内物体时，乂凝成水，流至底层贮水处，故不至干涸。灭菌时，将培养基放在器内，每天加热100C30分钟、连续三天，第一天加热后，其屮的营养体被杀死，将培养基取出放室温下18-24小时，使其中的芽砲发育

6、成为营养体，第二日再加热100°C30分钟，发育的营养体又被杀死，但可能仍留冇芽砲，故再重复一次，使彻底灭菌。一-般凡能用高压蒸汽灭菌的物品均不采用此法灭菌。⑶煮沸消毒法注射器和解剖器械等可用煮沸消帝法。一般微牛•物学实验室中煮沸消奇吋间为10-15分钟，人用注射器和手术器械在有条件的地方，一般均采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法灭菌。㈡、过滤灭菌许多材料例如血淸与糖溶液应川-•般加热消毒火歯方法，均会被热破坏，因此，采川过滤除菌的方法。应用最广泛的过滤器有蔡氏（Seitz）过滤器和膜过滤器。蔡氏过滤器是用银或铝等金属做成的，分为上、下两节、过滤时，用螺旋把石棉板紧紧地夹在上、下两节滤器

7、Z间，然后将溶液置丁•滤器中抽滤。每次过滤必须用一张新滤板，蔡氏过滤器的结构如图。滤膜过滤器的结构与蔡氏过滤器相似，只是滤膜是-•种多孔纤维素（乙酸纤维索或硝酸纤维索），孔径一般为0.45mm,过滤时，液体和小分子物质通过，细菌被截留在滤膜上，但若耍将病毒除掉，则需更小孔径的滤膜。㈢、紫外线灭菌紫外线波长在200300nm,具有杀菌作用，其中以265266nm杀菌力绘强。无菌室或无菌接种箱空气可川紫外线灯照射灭菌。㈣、化学药品灭菌化学药品消毒灭菌法是应用能杀死微生物的化学制剂进行消毒灭菌的方法。实验室桌而、用具以及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒灭菌。常用的有2%煤酚皂溶液（來苏尔

8、）、0.25%新洁尔灭、1%升汞、3-5%的甲醛溶液、75%酒精溶液等,见表V-lo常用化7杀菌剂应用范

9、T；I和常用浓度表类别实例常用浓度应用范围醇类乙醇50-70%皮肤及器械消酸类乳酸0.33-lmol/L空气消毒（喷雾或熏蒸）食醋3-5ml/m3熏蒸消毒空气，可预防流感病碱类石灰水1-3%地面消毒酚类石炭酸5%空气消毒（喷雾）来苏尔2-5%空气消毒、皮丿扶消毒醛类福尔马林40%溶液2-6ml/m3接种室、接种箱或厂房熏蒸消毒重金属离子升汞0.1%植物