高分辨熔解曲线分析法检测急性髓细胞白血病IDH2基因突变.pdf

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1、·664·临床检验杂志2012年9月第30卷第9期ChinJClinLabSci，Sep．2012，Vo1．30，No。9文章编号：1001-764X(2012)09-664-04·临床检验技术研究·高分辨熔解曲线分析法检测急性髓细胞白血病IDH2基因突变薛娣，邵睿，林江，肖高飞，钱军，姚冬明，柴海彦。，李云，杨静，王翠竹，陈星星。(江苏大学附属人民医院a．病理科，b．实验中心，e．血液科，江苏镇江212002)摘要：目的建立高分辨熔解曲线分析(HRMA)技术检测急性髓细胞白血病(AML)中可溶性异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)基因突变。方法针

2、对IDH2突变位点设计PCR扩增引物，建立带有温度内标校准品的PCR扩增体系，对98例AML患者标本进行PCR扩增，用HRMA技术对PCR产物进行突变分析，并通过DNA测序技术对HRMA结果进行验证。结果对98例AML样本的PCR产物进行HRMA检测，发现5例存在异常熔解曲线，对此5例标本及随机选择的HRMA显示为野生型的35例IDH2标本进行DNA测序验证，结果表明，存在异常熔解曲线的5例标本为4例R140Q突变和1例R172K突变，其余35例经DNA测序证实为野生型IDH2；对不同浓度梯度的R140Q质粒HRMA检测结果表明其灵敏度为2

3、％。结论成功建立HRMA技术检测IDH2突变，其可用于AML标本的临床检测。关键词：高分辨熔解曲线分析；可溶性异柠檬酸脱氢酶2；基因突变；急性髓细胞白血病中图分类号：R733．71文献标志码：AHigh-resolutionmeltingcurveanalysisfordetectionofisocitratedehydrogenase2mutationsinacutemyeloidleukemiaXUEDi，SHAORui，LINJiang。，XIAOGao-fei，QIANJun，YAODong—ming。，CHAIHai—yan，LI

4、Yun，YANGJing。，WANGCui—zhu，CHEN一xing(1．DepartmentofPathology；2．LaboratoryCenter；3．DepartmentofHematology，AfiliatedPeopleSHospitalofJiangsuUniversity，Zhenjiang212002，Jiangsu，China)Abstract：ObjectiveToestablishhigh—resolutionmeltingcurveanalysis(HRMA)techniquefordetectingisoc

5、itratedehydrogenase2(IDH2)mutationsinacutemyeloidleukemia(AML)．MethodsTheprimersforIDH2mutationsweredesignedandPCRsystemwithinternaltemperaturecalibratorswasestablished．Thebloodsamplesfrom98AMLpatientswereamplifiedandanalyzedbyHRMA．Di—rectDNAsequencingwasperformedtoconfirm

6、theresultsofHRMA．ResultsFor5ofthe98AMLsamplesabnormalmeltingCurveswereidentifiedinHRMA．The5sampleswithabnormalmeltingcurvesand35randomlyselectedsampleswithwild—typeDNAdetectedbyHRMAwerecheckedbysequencing，andR140Qmutationwasfoundin4samplesandR172Kmutationwasin1sample．The35

7、sampleswerealsoconfirmedaswild—typebyDNAsequencing．ThesensitivityoftwopercentwasdeterminedbyHRMAforplasmidDNAwithdifferentconcentrationsofR140Qmutant．ConclusionTherapid．easyandsensitiveI-IRMAmethodwasestablishedandmaybeusedforhigh—throughputscreeningofⅡ)mutationsinAMLpatie

8、nts．Keywords：high．resolutionmeltingcurveanalysis；isocitratedehydrogenase2；genemutation；ac