微小RNA-16逆转上皮性卵巢癌顺铂耐药的研究.pdf

《微小RNA-16逆转上皮性卵巢癌顺铂耐药的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、现代妇产科进展2012年7月第2l卷第7期ProgObstetGynecol，Ju1．2012，Vo1．21，No．7·论著·微小RNA一16逆转上皮性卵巢癌顺铂耐药的研究唐蕊，崔竹梅，娄艳辉，李岩，姚如永(青岛大学医学院附属医院a．妇科．b．中心实验室，青岛266001)【摘要】目的：研究微小RNA一16(miR一16)在人上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其与顺铂耐药的关系。方法：脂质体lip0fectamine2o00介导miR．16成熟体模拟物(mimics)及阴性对照片段(NC)分别转染人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP。实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR一16的表达；蛋

2、白印迹法检测细胞中Bc1．2蛋白、c．myc蛋白的表达；四甲基偶氮唑蓝(MIT)比色法检测细胞的顺铂半数抑制浓度(IC∞)；caspase一3活性检测试剂盒检测细胞内caspase．3酶的活性；流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果：(1)SKOV3／DDP细胞顺铂耐药指数(RI)为5．33；(2)SKOV3／DDP细胞中miR．16表达水平明显低于SKOV3细胞，约为后者的1／10(P=0．000)，转染miR．16mimics后SKOV3／DDP细胞中miR一16水平升高约660倍(P=0．001)；(3)SKOV3／DDP细胞Bcl一2、c．myc蛋白的相对表达量较SKOV3细胞明显升高，转

3、染miR．16mimics后SKOV3／DDP细胞Bcl一2、c．myc蛋白的相对表达量明显降低(P<0．01)；(4)SKOV3／DDP细胞转染miR．16mimics后，顺铂IC。(14．19+0．06)较转染NC组(22．52+0．60)明显降低(P=0．002)，且顺铂作用后caspase一3的酶活力单位也明显升高(P=0．000)；(5)顺铂(201,g／m1)作用24h、48h后，SKOV3组凋亡率明显高于SKOV3／DDP组，转染miR．16mimics的SKOV3／DDP细胞凋亡率约为转染NC细胞的1．5倍(P<0．01)。结论：miR一16可能通过靶向下调上皮性卵巢癌细胞B

4、cl一2蛋白，并协同调节c—myc蛋白的表达，增强卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性，发挥逆转耐药的作用。【关键词】微RNAs；卵巢肿瘤；铂；抗药性，肿瘤；细胞凋亡中图分类号：R737．31文献标志码：A文章编号：1004-7379(2012)07-0536-04Reversalofcisplatin．resistanceinovarianepithelialcarcinomacellsbymiR．16．Tang尺ui，CuZhume，Yanhu，eta1．DepartmentofGynecology，theAfiliatedHospitalofMedicalCollege，Qingd

5、aoUniversity，Qingdao266001【Abstract】objective：ToinvestigatetheexpressionofmicroRNA一16(miR-16)andtherelationshipwithcisplatin．resistanceinhumanovarianepithelialcarcinomaSK0V3／DDPcells．Method：TheSK0V3／DDPceilsweretransfectedwithmiR．16mimicsornegativecontrolRNA(NC)by1ipof~ctamine2000．Theexpressionofmi

6、R一16wasdetectedbyqRT．PCRineachgroup，andWesternblotwasusedtodetecttheexpressionofBcl一2andc-mycprotein．MTrwasusedtodeterminethecisplatinICnofthecells．Andthecaspase一3enzymeactivitywasmeas．uredbycaspase．3activityassaykit．Therateofapoptoticcellwasdetectedbyflowcytometrymethod．Results：(1)Thecispahin—resi

7、stanceindexofSKOV3／DDPcellswas5．33．(2)ThelevelofmiR16inSKOV3／DDPcellswassignificantlylowerthanthatinSKOV3cells．aboutone．tenthofthelatter(P=0．000)．AndthelevelofmiR一16inthecellstransfectedwithmiR．16mimicswas6