表皮生长因子受体变异体促进上皮性卵巢癌侵袭及顺铂耐药的研究

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1、万方数据复旦大学博士学位论文表皮生长因子受体变异体促进上皮性卵巢癌侵袭及顺铂耐药的研究Exon4-DeletionVariantofEpidermalGrowthFactorReceptorEnhancesInvasivenessandCisplatinResistanceinEpithelialOvarianCancer博士研究牛导师指导小组成员学科专业院系张彭南孙红教授李宗海研究员妇产科学妇产科医院2013年4月万方数据

2、IIIIIIIIIIIIIIIIIIIY2704322目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9第一部分de4EGFR在卜-皮性卵巢癌中的表达及牛物学功能1．材料和仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯183．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯284．讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯375．／J、结⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39第二部分de4EGFR促进上皮性卵巢癌细胞侵袭的分r机制研究1．材料和仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯412．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯423．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯444．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯505．小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52第三部分de4EGFR促进上皮性卵巢癌细胞对顺铂耐药的初步研究1．材

5、料和仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯542．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯543．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯564．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯605．／J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62全文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯64中英文对照⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯76发表文章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯78文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯79致澍⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯90万方数据中文摘要卵巢癌是导致女性癌症患者死亡的第五大原因，但仍位居妇科肿瘤中患者致死的第一位。在过去的25年中，虽然其生存率有所改善，卵巢癌患者的5年生存率仍低于riO％。卵巢癌之所以预后不良，是冈为晚期患者发牛广泛转移和产生化疗耐药。卵巢癌丰要分为三种类型，上皮细胞型、基质细胞型和生殖细胞

7、型。其中多数的卵巢癌属于上皮性卵巢癌。表皮生长因子受体(EGFR)是一种跨膜糖蛋白，属于受体酪氨酸激酶生长因子受体家族，参与重要的牛理过程，如细胞的存活、增殖和运动。在众多人类肿瘤rfl，EGFR的过度表达都已被证实与肿瘤晚期和患者预后不佳具有密切相关性，如乳腺癌、肺癌、肝癌、前列腺癌和卵巢癌。在人类肿瘤中EGFR的编码序列经常会出现改变。其胞外结构域大部分的缺失的突变与患者预后不佳存在相关性。通常这些突变体能持续激活并使肿瘤细胞具有更强的生长能力，以及增加其恶性潜能。最近，de4EGFR，一种表皮生长因子受体(

8、EGFR)第4外显子缺失的变异体在胶质母细胞瘤和卵巢癌中被发现。然而，其对卵巢癌的生物学功能目前尚不清楚。在本课题中，我们对de4EGFR在上皮性卵巢癌中的表达，以及其对上皮性卵巢癌细胞增殖、侵袭力及耐药性进行了研究。第一部分de4EGFR在上皮性卵巢癌中的表达及生物学功能目的检测de4EGFR在上皮性卵巢癌组织中的表达及其对上皮性卵巢痛细胞生物学行为如增殖、侵袭等的影响。方法通过RT—PCR方法对12例正常卵巢组织及72例卜-皮性卵巢癌组织中de4EGFR的表达进行检测；体外实验中，通过慢病毒感染的方法在三种不

9、同上皮性卵巢癌细胞株SKOV3、CAOV3、ES2中过表达EGFR及de4EGFR，并通过Westernblot方法验证其过表达的效率。通过CCK一8实验观察其对细胞增殖的影响，通过Transwe]1实验观察其刘‘细胞转移与侵袭的影响；体内实验中，通过在裸鼠体内成瘤的方法评估de4EGFR对裸鼠体内瘤体大小与肿瘤重量的影响。结果研究结果显示在卜．皮性卵巢癌组织有48．6％