短期胰岛素刺激对HIT-T15细胞胰岛素原基因表达的影响.pdf

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1、天津医药2014年4月第42卷第4期289细胞与分子生物学短期胰岛素刺激对HIT—T15细胞胰岛素原基因表达的影响张君荣曦吴宇娟刘红【摘要】目的探讨短期外源性胰岛素刺激对HIT—T15胰岛p细胞胰岛素原(PI)基因表达的影响及机制。方法HIT—T15仓鼠胰岛瘤细胞随机分为4组：含1．4mmol／L葡萄糖完全培养基组作为空白对照(LG组)，为抑制内源性胰岛素释放干扰以低糖联合硝苯地平作为条件对照(LGC组)，在LGC基础上分别加0．5U／L或5U／L的外源性胰岛素作为实验组(分别为LINS组和HINS组)，分别在刺激后0、30、6

2、0、90、120min以荧光定量PCR检测各组PImRNA，免疫组化检测各组细胞胰岛素受体底物1(IRS1)酪氨酸磷酸化水平。结果(1)LINS组、HINS组细胞PImRNA表达均上调，在刺激后60minPImRNA表达量达高峰。(2)实验组在刺激后30minIRS1酪氨酸磷酸化水平较对照组明显增高，高、低浓度胰岛素组细胞酪氨酸磷酸化达高峰时间不同。(3)LG组和LGC组间PImRNA表达及IRS1酪氨酸磷酸化水平无明显差异。结论短期外源性胰岛素能上调胰岛13细胞PI基因的表达，且高浓度的胰岛素较低浓度胰岛素作用强。PI表达调控

3、与IRS1信号传导有关。【关键词】胰岛素原；胰岛素分泌细胞；硝苯地平；胰岛素受体底物1；酪氨酸磷酸化；HIT—T15细胞【中图分类号】R587．1【文献标识码】A【DOI】10．3969~．issn．0253—9896．2014．04．001TheShoRTermEfectofInsulinonProinsulinGeneExpressionofHIT—T15InsulinnomaCellsZHANGJun，RONGXi，WUYujuan，LIUHongDepartmentofGeriatricEndocrinology,the

4、FintAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Guangxi530021，China【Abstract】0bjectiveToinvestigatethe8horttermeffectofinsulinonproinsulingeneexpressionofHIT—T15insu—linnomacells(pancreaticislet3-cel1)．MethodsTheHIT—T15ceilswererandomlydividedintofourgroups．BlankCon

5、—trolGroup(LG)：completemediumcontain1．4mmol／Lglucose．Controlgroup(LGC)：CO—culturednifedipinewithmediuminordertorestainendogenousinsulinrelease．Experimentalgroup(LINSorHINS)add0．5U／Linsulinor5U／LinsulinontopofLGC．Afterbeingstimulatedfor0，30，60，90，120rains，proinsulin(P

6、I)mRNAlevelwereassessedbysemi—quantitativeRT-PCR．Insulinreceptorsubstrate1(IRS1)tyrosinephosphorylationwasdetectedbyimmunocytochemistry．Results(1)ExpressionofP1wasupregulatedbybothLINSandHINS，andpeakat60mins．(2)Afterstimulationfor30mins，thelevelofIRS1tyrosinephosphor

7、ylationintheexperimentalgroupwassignificantlyhigherthancontrolgroup，andthepeaktimebe—tweenLINSandHINSwasdifferent．(3)BetweengroupofLGandLGC，theexpressionofPImRNAandIRS1tyrosinephos·phorylationshownodifierence．ConclusionShorttermexogenousinsulinstimulationcanpromoteex

8、pressionofproinsulingenes，whichisconcentrationdependent．TheexpressionandregulationofP1wererelatedwithIRS1signaltransduction．【Keywor