柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法.pdf

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1、5cienceof赡2012，38(1)：0097—0101ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chin~ourna1．net．cn柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法王伯阳姜义仁，臧敏石生林杨瑞生包臣秦利(沈阳农业大学生物科学技术学院，辽宁省昆虫资源工程技术研究中心，沈阳110866；吉林省农村工作委员会园艺特产站，长春130000；沈阳农业大学植物保护学院，沈阳110866)摘要利用柞蚕微孢子虫孢子液直接免疫家兔获得柞蚕微孢子虫多克隆抗体后，分别采用双抗夹心法和竞争法制作胶体金免疫层析试纸条，建立能简便、快捷、准确诊断柞

2、蚕微粒子病的柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法。双抗夹心法和竞争法分别是将柞蚕微孢子虫多克隆抗体与25nm和17am的胶体金颗粒结合并固定在金标垫上，然后均将羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素膜上作为质控点(C)，但是2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的反应模式不同：前者是以柞蚕微孢子虫多克隆抗体作为检测点(T)，而后者以柞蚕微孢子虫孢壁蛋白作为检测点(T)。2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的检测时间均为10min，检测灵敏度为0．8×l0个／mL，与柞蚕血淋巴无交叉反应，特异性强，操作简单，其中，以双抗夹心法制作的试纸条显色更清晰，结果更可靠，更具实用价值。关键词

3、柞蚕微孢子虫；多克隆抗体；胶体金；免疫层析；双抗夹心法；竞争法中图分类号$885．1文献标识码B文章编号0257—4799(2012)01—0097—05RapidDetectionofNosemapernyibyColloidalGoldImmunochro—matographyWANGBo—YangJIANGYi—Ren，。ZANGMinSHISheng—Lin’YANGRui—ShengBAQChenQlNLi(’CollegeofBioscienceandBiotechnology，ShenyangAgriculturalUniversity，Lia

4、oningEngineeringandTechnologyRe—searchCenterforInsectResources，Shenyang110866，China；HorticultureandNativeProductStation，RuralWorkCommitteeofJilinProvmce，Changchun130000，China；。CollegeofP／anfProtection，ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang110866．China)AbstractThepolyclonalantibody

5、againstNosemapernyiwaspreparedbyimmunizingrabbitsusingthesuspensioncontainingsporesofN．pemy

6、andwasusedtopreparecolloidalgoldteststripsforimmunochromatographicassaythroughdoubleantibodysandwichmethodandcompetitionmethod．Theestablishedcolloidalgoldimmunochromato—graphicassaycouldhave

7、asimple，rapidandaccuratediagnosistopebrinediseaseinAntheraeapernyi．ThedoubleantibodysandwichmethodandcompetitionmethodconjugatedthepolyclonaIantibodywith25nmand17nmcolloidaIgoldparticlesrespectivelyandboundtheconjugatedproductsonagold—labeledpad．Then，goatanti·rabbitsecondaryantibod

8、ywasspottedonnitrocellulosemembraneascontroIdot(C)forbothmethods．However，thereaction收稿日期：2011—09—24接受日期：2011—10—12pa~ernsforpreparingcolloidalgoldteststripswerediffer-资助项目：现代农业产业技术体系专项(No．CARS-22)，辽宁省教育厅科研项目(No．L2010512)，沈阳农业大学校青年基金entforthetwomethods：thefOrmertookthepolyclonal(No．

9、201010002)。antibodyagainst