间接竞争ELISA法对柞蚕微孢子虫的检测.pdf

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1、应用昆虫学报ChineseJournalofAppliedEntomology2013，50(5)：1364～1370．DOI：10．7679／j．issn．2095—1353．2013．187间接竞争ELISA法对柞蚕微孢子虫的检测术姜义仁王伯阳孙影王勇石生林杨瑞生段玉玺秦利(1．沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁省昆虫资源工程技术研究中心沈阳110866；2．沈阳农业大学植物保护学院沈阳110866)摘要柞蚕微孢子虫病是柞蚕唯一的检疫性病害，其致病病原物为柞蚕微孢子虫(NosemapernyiDing，Su＆Wen)，因此，柞蚕微孢子虫的检测对于该病的防治具有重要意义。本文通过

2、制备柞蚕微孢子虫多克隆抗体，建立柞蚕微孢子虫间接竞争ELISA检测法。结果表明，柞蚕微孢子虫多克隆抗体效价为1：10、浓度为3mg·mL～，主要由2条大小约50ku和25ku蛋白条带组成，可作为后续试验多克隆抗体材料。间接竞争ELISA法最佳抗原工作浓度为2．0g·mL微孢子虫孢壁蛋白溶液，最佳抗体工作浓度为兔抗血清按1：10倍浓度稀释，酶标二抗最佳工作浓度为1：5×10倍稀释，柞蚕微孢子虫间接竞争ELISA检测法的灵敏度为1．6×10spores·mL～。间接竞争ELISA法在柞蚕微孢子虫的检测方面具有一定的应用价值。关键词柞蚕微孢子虫，酶联免疫吸附测定，多克隆抗体，检测Use

3、ofIC-ELISAtodetectNosemapernyJIANGYi-RenWANGBo—YangSUNYingWANGYong。SHISheng—LinYANGRui—ShengDUANYu—XiQINLi(1．CollegeofBioscience＆Biotechnology，ShenyangAgriculturalUniversity．LiaoningEngineering＆TechnologyResearchCenterforInsectsResources，Shenyang110866，China；2．CollegeofPlantProtection，Shenyan

4、gAgriculturalUniversity，Shenyang110866，China)AbstractMicr0sporidiosisistheonlyquarantinablediseaseofAntheraeapernyi．Nosemapernyiisthelethalpathogenofmicr0sporidiosis．Therefore，thedetectionofthesporesofN．pernyiisimportanttopreventandtreatthisdisease．Inthispaper，theeffectivenessofanindirectcomp

5、etitiveELISAfordetectingthesporesofN．pernyiinA．pernyiwasstudiedbypreparingthepolyclonalantibodyforN．pernyi．ThepolyclonalantibodyagainstN．pernyiwaspreparedbyimmunizingrabbitsusingasuspensioncontainingsporesofN．pernyi．Thetitreandantibodyconcentrationwere1：10and3mg·mLrespectively，theantibodymain

6、lycontainedtwoproteinstrapswithmolecularweightsof50kuand25ku．respectively．Theresultantpolyclonalantibodycanbekeptforfurtherstudy．TheoptimalantigenconcentrationfortheIC—ELISAwas2．0g·mL～sporewallproteinofN．pernyi，theoptimalpolyclonalantibodyconcentrationwas1：10，HRP—IgGoptimalconcentrationwas1：5

7、×10andthesensitivityofthemethodwas1．6×10spores·mL～．ThemethodhadsomevalueinthedetectionofN．pernyi．KeywordsNosemapernyi，ELISA，polyclonalantibody，detection柞蚕微孢子虫病是影响柞蚕生产最为严重的势，已严重威胁到柞蚕产业的健康发展(徐耀军和病害之一，也是柞蚕生产中唯一的检疫性病害，病陈大光，2006)。柞蚕微孢子虫病检测对于保障柞原为柞