输注分子嵌合小鼠前体T细胞抑制异源小鼠T细胞增殖反应的研究.pdf

《输注分子嵌合小鼠前体T细胞抑制异源小鼠T细胞增殖反应的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、·36·国际生物医学工程杂志2014年2月第37卷第1期IntJBi0medEng，Febmarv2014，Vol37，No．1·论著·输注分子嵌合小鼠前体T细胞抑制异源小鼠T细胞增殖反应的研究陆礼宋东旭李卫东付蔚华【摘要】目的研究分子嵌合前体T细胞(pre—T细胞)对异基因T淋巴细胞增殖能力的影响，旨在为研究同种异体器官移植诱导免疫耐受提供新策略。方法RT—PCR获取C57BId6小鼠MHC—I等位基因H一2Kl1和H一2D“基因，并与pIRES质粒连接，构建重组质粒并转染体外培养BALB／c小鼠pfeT细胞构建分子嵌合细胞，并设立未转染及转染空质

2、粒对照组。各组细胞回输BALB／c小鼠，7d后提取各组小鼠脾脏T细胞，将其与C57BL／6小鼠T淋巴细胞混合培养，观察刺激指数(sI)。结果构建质粒测序表明，插入序列的结果包含GenBank检索的C57BU6小鼠H一2和H一2D序列，流式细胞仪检测质粒pIRES—H一2Kh和plRES—H一2D_l车专染后，pre—T细胞表面H一2K“及H一2D“蛋白的表达增高，与未转染组及转染空质粒组相比，其差异均具有统计学意义(RO．05o单向混合淋巴细胞培养结果显示：2质粒共注射pre-T细胞组的sI值(0．764_+0．074)较空质粒组(0．983_+0．

3、081)和未转染组(0．994_+0．142)明显下降，其差异有统计学意义(尸<0．05)。结论分子嵌合细胞可降低受体T细胞对异基因T淋巴细胞刺激的增殖反应，有望应用于体内诱导免疫耐受。【关键词】MHC—I基因；前体T细胞；分子嵌合；刺激指数中图分类号：R392．12文献标识码：A文章编号：1673—4181(2014)01—0036—04Researchonmolecularchimericmicepre-Tcellsinfusiont0reduceresponsetoallogeneicTcellsstimulationLuLi，SongDong

4、xu，LiWeidong,FuWeihua．Department0／’GeneralSurgery,GeneralHospitalofTi~mjinMedicalUniversity,Tiaztjin300052，China【Abstract】ObjectiveToresearchtheeffectofmolecularchimericmicepre—TcellsonproliferationabilityofallogeneicmouseTcells．MethodsTheMHC—IgenefH一2KbandH一2D“gene、wereextract

5、edandamplifiedbyRT—PCR，theidentifiedpre—TcellsweretransfectedbytheconstructedeukaryoticexpressionvectorofC57BL／6mouseMHC—I(plRES—H一2DbandplRES—H一2Kb)，non—transfectedgroupandshamplRES—transfectedcontrolgroupwereset．ThemolecularchimericcellsweretransfusedbacktoBALB／cmouse．After7d

6、ays，Tlymphocytecellsofeachgroupwereextracted，theabilityofmolecularchimericcellsinducingspleenTlymphocyteresponsetoallogencicTcellswasobservedthroughmixedlymphocyteculture(MLC)．ResultsSequencingoftheplasmidwehaveconstructedshowedthatinsertionsequencecontainedC57BL／6miceH一2KandH一

7、2DserieswhichcouldberetrievedfromGenBank．TheresultofflowcytometryanalysisindicatedthatH一2K“andH一2Dproteinhadanincreasedexpressioninpre—Tcells，thedifferencewithothertwogroupswasstatisticallysignificant(P<0．05)．TheresultofMLCdemonstratedthatthestimulationindex(SI)ofTlymphocyteinC

8、O—injectiontransfectedpIRES—H一2KandpIRES—H一2Dpre—Tcell