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1、uo:6,1976〔39〕ClarkDA:nJImmu82ccrAE一t:l】:1:。】护r、ti(川pr。,(37:2374.19了8lmml116JD1:’.nol1211389,1978〔40〕ChaouatG。t。l:1:飞。;tI。:t,。。、IE`tal:JTrnnltrrl。、!12J1〔44〕(1978:.:《,·,nol12213831979〔41〕Robert、TKinPrin19了9〔45〕H。头,arolA丁之。舒al:Jl功mz:门01!]9:1213..onoo,〕Immlg手IP777一778Au
2、、trojionA。。d。。,手of1977〔46〕Ni”n。nla,:!1etal:Tranlantation叩.eienee,1977,,1,,·仁;、neaunoS25:691978〔47〕NiJtl:丁mm42〕Pee:xpMed148:36019了8〔43〕,〔kABJE122:173619Tg小鼠细胞毒T淋巴细胞和它们前身的定量测定.KTrunnerBHaeonaRMDld二CTaswellZ二序言5`:,早期用形态学的方法来观察淋巴细胞对C释放试验中包含效应细胞的淋巴样,,,靶细胞的破坏作用方法不可靠故一直未细胞
3、群的细胞毒活性是通过获得50%的特。”’r获成功随着放射性同位素标记物进入靶细异性C释放所需要的淋巴细胞浓度而决,。胞的方法的发展测量细胞参与细胞毒的试定的包含在不同淋巴样细胞群中的效应细,。,验方法才具有客观性和精确性胞的相对频率可以通过对诱导50%溶解所。。5’Cr虽然它是使用最广泛的放射性同位素需要的淋巴细胞数量的比较来估计“’r,,C标记的铬酸钠加入到靶细胞中去后在所选择的系统中已经产生有价值的结果6’r,,。C进入细胞浆中直到细胞膜破坏时然而技术上仍然存在着严重的局限性“`Cr,释才大量地被释放出来放的标记物缺乏平行
4、剂量反应曲线是试验的局限性,,。,不会再结合到未破坏的细胞中去因此直接之一它影响对结果的分析一方面如果,-靶细胞的溶解就可作为测定的唯一参数参对含有相对高的细胞毒T淋巴细胞(Cyt。,`,icTLlocyets与这一过程的有关细胞称为细胞毒的效应lytymlPCfL)发生率的不。,:细胞同淋巴样细胞群的各种结果进行比较比如-虽然用定量的方法已经能够测定靶细胞混合白细胞培养(mixedleukocyetcul,,MLC)细胞群,的破坏但是具有溶解靶细胞作用的效应uter或者以不同沉降速度,,C亚,就可画出平行细胞确实发生的频率直
5、到最近在很大程分段获得的ML细胞群。,度上仍然是一个没有解决的问题由于缺乏剂量反应曲线谱(如图1和6所示)从而。较方便的测试系统来测定效应细胞在单细胞能够作出细胞毒活性的直接比较另一方`,因此通常都是测定效应细面,CfL发生时的细胞毒活性如果对含有高和低不同率的细。:胞在群体时的细胞毒活性在广泛使用的胞群的各种结果也进行比较(比如用不同.二Ludng瑞士实验肿瘤研究所免疫室wi肿瘤研究所人类肿瘤免疫室一笋02一一,CTL和它们前身数量的正常细胞稀释免疫淋巴样细胞)那作都集中在测定单细胞时。,么观察到的剂量反应曲线就不再平行了(
6、如的计数上目前有些方法已经取得了相当的,,。图2所示)也就不可能作出细胞毒活性的成就这将在下面进一步加以详细说明这。,,:,直接比较所以缺乏平行曲线也就阻碍些试验是建立在两种不同方法上的其一了在不同细胞群中,利用靶细胞溶解的第一步,即作出对效应细胞相对发CTL能牢固地。,,生率有关的任何结论还有一个局限性是粘附在靶细胞的特异受体上并在适当的条,,。淋巴样细胞群的细胞毒活性不仅可能与发件下导致稳定的结合物的形成由于这种生率有关,而且还与在总淋巴细胞群中效,,结合物大都能引起溶解因此对它们的计。,。,应细胞亚群本身的效能有关所以即
7、使获数就能直接对CTL发生率计数其二是建,得了平行曲线仍然不能获得同效应细胞发立在效应细胞和(或)前身细胞发生率的。_。“”L生率和效率有关的可靠的直接信息为了克有限稀释分析的这一新型有效的技,,不仅能服这些缺陷和问题我们几次试图为淋巴细术直接计算最小量的CTL或细胞毒,T淋巴细胞前身(Coeo-胞参与的细胞毒动力学建立数学模式希望ytlytiTlymphcerecitsor,一,通过这样的研究能够发现一种为细胞毒活性ytpCTLp)发生率而且还能、。一资料分析提供更好更多信息的方法应用到个体CTLP和它们无性繁殖系子代。鉴于
8、上述这些问题都与在群体细胞中测特异性的分析中去现仅就CTL在单细胞时,因此近几年来大量的工。试细胞毒活性有关测定方法介绍如下、二细胞毒T淋巴细胞在单细胞时的计数一,sson有限稀释的条件下测试CTLPPio统“”5’Cr(一)微t在有限稀释条件。,计学是不能应用的但就计数而言
