氯碘羟喹对β-淀粉样蛋白聚集影响的体外研究.pdf

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1、·348·国际药学研究杂志2014年6月第4l卷第3期JIntPharmRes，Vo1．41，No-3，June，2014氯碘羟喹对Ij；．淀粉样蛋白聚集影响的体外研究李鑫，黄晏，胡增晓，刘港，周文霞，张永祥[摘要]目的考察氯碘羟喹(clioquinol，C0)在体外对B一淀粉样蛋白(p．amyloid，AB)聚集的影响以及这种作用是否与金属离子Zn：+相关。方法采用硫黄素T(thionavin。Th．T)结合实验检测聚集态n[3；采用全波长吸收光谱扫描和竞争结合实验排除ThT结合实验中可能存在的假阳性因素；采用圆二色谱

2、检测AB的8一折叠。结果CQ直接与单体态AB或聚集态AB共孵育24h后均能明显降低Th—T的荧光强度：全波长吸收光谱扫描显示CQ在450am和485nm附近均无特异性吸收峰：竞争结合实验表明，增加Th_T无法使体系的荧光强度恢复到最大；圆二色谱扫描结果表明，CQ可抑制AB的B折叠形成。CQ影响AB聚集的量效关系研究表明，单体态AB与CO孵育时，其抑制A[3聚集的IC值在无Znz+和含Zn2~体系中分别为6．1和4．3I~mol／L；在已聚集的A[3体系中，其解聚A[3的IC值在无Zn2+和含Zn2+体系中分别为7．5和6

3、．1p．mol／L。结论CQ可直接抑制AB聚集，并使已聚集的A8解聚，且在pH为6．6条件下，实验体系中的Zn2+对CQ抗AB聚集的能力没有明显影响。[关键词]阿尔茨海默病；氯碘羟喹；B一淀粉样蛋白；硫黄素T【中图分类号]R284．1【文献标志码]A【文章编号]1674．0440(2014)03—0348—06DoI：10．13220~．cnki．jipr．2014．03．016Efectofclioquinolonaggregationof13-amyloidinvitroLIXir，HUANGYan，HUZeng—y

4、ao，LIUGang，ZHOUWen—xia，ZHANGYong-xiang(StateKeyLaboratoryofToxicologyandMedicalCountermeasures，InstituteofPharmacologyandToxicologyAcademyofMilitaryMedicalSciences，BeOing100850，China)[Abstract]ObjectiveTostudywhetherthemetalchelatorclioquinol(CQ)canafect[3-amyloi

5、d(At3)aggregationdirectlyinvitroandwhetherthisefectcouldbeinfluencedbyZn“．MethodsInthestudythioflavinT(Th—T)fluorescencewasusedtodetecttheaggregatedA[3．Toeliminatethepossiblefalsepositiveresults，theabsorptionspectrum(300nmto600nm)ofCQwasscanned，andacompetitivebin

6、dingassaywas印pliedtodeterminewhetherThandCQhadthesamebindingsiteonAB．Circulardichroismspectroscopywasusedtodetect[3-sheetformationofA[3．ResultsCQcoulddecreasethefluorescenceintensity，whenincubatedwithmonomerA[3oraggregatedA[3for24h．AbsorptionspectraindicatedthatC

7、Qhadnospecificabsorptionpeakat450nmand485nm．CompetitivebindingassayshowedthatCQandTh-TdidnotbindthesamesiteonA[3．CDspectrashowedthatCQcoulddecreasetheB—sheetformationofA[3．Whenincubatedwithmonomern[3，CQdecreasedthefluorescenceintensityinadosedependentmanner，andth

8、eIC50were6．1p．moFL(withoutZn)and4．3I~mol／L(withZn“)；WhenincubatedwithaggregatedA[3，CQdecreasedthefluorescenceintensityinadosedependentmannerand，andtheIC50was7．