外周血PBMC的分离.doc

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1、外周血PBMC的分离原理n外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。1.093外周血红细胞粒细胞单个核细胞血小板淋巴细胞单核细胞1.030~1.0351.075~1.090Ficoll：1.077±0.001(PBMC)1.0921500rpm,20℃,30minPBMC红细胞粒细胞Ficoll稀释外周血Ficoll稀释的血浆、血小板实验步骤n1.采血，稀释（外周血：稀释液=1：2）n2.在离心管中加入Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：稀释血=1

2、：2）n3.18℃，1500r/min，离心30minn4.轻轻吸取PBMC层移入另一试管中n5.加足量稀释液充分洗涤，1800r/min离心5min，弃上清。注意事项n每毫升外周血液大约可获1×106单个核细胞nFicoll应适量，外周血应充分稀释n温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果n在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面n吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染