建兰花叶病毒贵州分离物的分子鉴定.pdf

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1、2014年第5期植物检疫PLANTQUARANTINEVo1．28No．5建兰花叶病毒贵州分离物的分子鉴定李欲轲洪鲲张宇斌乙引万晴姣(贵州师范大学生命科学学院贵州贵阳550001)MolecularidentificationofCymbidiummosaicvirusisolatedfromPaphiopedilumdianthuminGuizhou(China)．LiYuke，HongKun，ZhangYubin，YiYin，WanQingjiao(SchoolofLifeSciences，GuizhouNormalUniversity，Guiyang550001，

2、China)AbstractAsuspectedCymbidiumMosaicI&us(CyMV)wasisolatedfromPaphiopedilumdianthumcultivatedinGuizhouAcademyofForestrywithmosaicsymptombybiologicalmethod．Thecoatprotein(CP)geneofthevirusisolatewasthencloned，sequencedandanalyzed．TheresultsshowedthattheCPgene，withlengthof672bp，encodesa2

3、23一aminoacidCPprotein．SequenceanalysisbasedontheCPgeneshowedthatthenucleotidesequenceoftheisolatesharedover95％homologywith16reportedCyMVisolates，whilelessthan50％withotherthreevirusesbelongingtoPotexvirus，demonstratingthatthevirusisolatedfromPaphiopedilumdianthumisCyMV．KeywordsCymbidiummo

4、saicvirus；coatprotein；molecularidentification；Paphiopedilumdianthum摘要采用生物学方法对ELISA检测为阳性的建兰花叶病毒贵州长瓣兜兰分离物(CyMV-GZ)进行纯化。RT-PCR技术克隆其外壳蛋白(CP)基因并测序，使用DNAMAN7．0和MEGA5．0软件对CyMV-GZ的CP基因进行同源性分析。结果表明：成功克隆该病毒CP基因，其序列长度为672bp，编码223个氨基酸残基；序列同源性分析显示，该分离物的CP基因与16种已报道的CyMV各地分离物同源性均达95％以上，而与同属其他3种病毒CP基因同源

5、性均低于48％，由此证明该长瓣兜兰分离物为CyMVo关键词建兰花叶病毒；外壳蛋白；分子鉴定；长瓣兜兰中图分类号S41．30建兰花叶病毒fCymbidiummosaicvirus，知该种病毒在世界各地分布较广】，其中，韩国、CyMV)，又名兰花花叶病毒，隶属线形病毒科曰本、印度尼西亚以及中国等国家都有报道。在(Flexiviridae1马铃薯x病毒属(Potexvirus)]，基中国，进口洋兰是CyMV的主要毒原之一，主要因组为(+)ssRNA。其外壳蛋白(Coatprotein，分布在广东、福建、海南、江苏等沿海省份的不同CP)基因的ORF长度为672bp，编码223个

6、氨基酸地区，且有逐步向内陆地区蔓延的趋势_6】。残基，蛋白分子量23．6kDa[2】。CyMV可以系统性贵州省是国兰的资源大省，有兰科植物71属、侵染兰科植物，引起包括花叶、褪绿、畸形和坏死206种(含变种)，占全国173属的41％，1240个种的等症状【2】，与齿兰环斑病毒(ORSV)复合侵染，危16．6％，是我国兰科植物的分布中心之一[。近年害更为严重。是目前对兰花产业威胁最为主要和来，随着兰花资源的不断开发，贵州的兰花产业开严重的病毒之一[3】。兰花产业的全球化趋势为兰始逐渐呈现规模化发展，如何确保兰花产业的持花病毒在世界范围内的传播提供了可能。目前己续、快速、健

7、康发展，是当前所面临的主要问题之基金项目：长江学者和创新团队发展计划资助(PCSIRT)；贵州省重点实验室项目[黔科合计z字[201114005号]；贵阳市星火计划项目[(2010)筑科农合同字第1一农一23号]；贵州省社发攻关项卧黔科合sz字(2011)3100号]；贵州省农业攻关项目[黔科合NY字(2010)3031]；贵州省科技联合基金[黔科合J字LKS(2010)17]通讯作者：E-mail：wanqingjiao@aliyun．corn收稿日期：2014．03—25·67。2014年第5期植物检疫PLANTQUARANTINEV